抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体在拟南芥中的表达及其免疫学特性的初步研究
发布时间：2021-03-28 06:57
汉滩病毒（HTNV）主要引起肾综合征出血热（HFRS）,迄今尚无特异、有效的治疗药物。抗HTNV鼠源性单克隆抗体（mAb）,虽然有较好的抗病毒作用,但应用于人体可能产生抗鼠抗体。而人源性mAb制备困难、产量低,目前也难以应用。基因工程抗体在原核系统中表达虽然产量较高,但由于其受加工修饰功能的限制,会影响表达产物的生物学特性;而真核表达又存在表达量低的难题。运用合适的植物表达系统表达抗体不仅表达产量高,而且由于植物表达系统有良好的加工修饰功能,其表达产物能保持良好的生物学特性。本研究用基因工程技术构建了鼠/人嵌合抗体基因,并将其导入拟南芥内,尝试在植物体内表达,主要方法和结果如下:1.将抗HTNV鼠源性mAb 3G1的可变区基因及人抗体恒定区基因进行拼接,构建了植物嵌合表达载体3G1MH-pCAMBIA2301,转化入根瘤农杆菌中,利用根瘤农杆菌介导的抽真空转基因技术转化野生型拟南芥,获得转基因植株。提取T0代转基因植株基因组DNA,应用针对轻、重链序列的特异性引物进行PCR检测,筛选出整合有目的基因的阳性植株。以轻、重链探针对RNA进行Northern Blot检测,检测出完整的轻、重...
【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pBI121载体Fig1-1ThemapofthepBI121vector
图 1-2 pCAMBIA2301 载体Fig 1-2 The map of the pCAMBIA2301 vector酶DNA聚合酶购自MBI公司TaKaRa公司。DNA限制性内切酶接酶等主要分子生物学试剂购自TaKaRa公司。试剂盒小量质粒提取试剂盒购自博大泰克公司。DNA纯化试剂盒（CONCERTTMRapid Gel Extraction Systemo公司。缓冲液及试剂的配制菌培养基 LB 培养液：1%Tryptone （Oxide LTD），0.5%Yeast Extrac
图 2 SP- 3G1VH 片段的 PCR 扩增结果 2 PCR amplification of SP- 3G1VH fra：DNA Marker；2, 3, 4：Amplified prod1 2bp20001000900750500250100图 3 CH 片段的 PCR 扩增结果3 PCR amplification of CH fragmentDNA Marker；2：Amplified product
【参考文献】：
期刊论文
[1]抗汉坦病毒单链抗体基因向拟南芥遗传转化的初步研究[J]. 罗雯,吴兴安,李莺,徐志凯. 中国人兽共患病学报. 2007(12)
[2]沈阳市皇姑区流行性出血热流行特征分析[J]. 崔景义,杜娟,杨杰. 基层医学论坛. 2007(06)
[3]根癌农杆菌转化条件优化的研究[J]. 罗雯,刘阳. 生物技术. 2006(01)
[4]热带地区拟南芥栽培技术及基因转化体系的构建[J]. 李啸浪,胡新文,刘晓丽,郭建春. 热带作物学报. 2005(03)
[5]影响根癌农杆菌的电击转化条件[J]. 匡小婴,饶志明,沈微,方惠英,诸葛健. 食品与生物技术学报. 2005(04)
[6]汉滩病毒G2重组腺病毒的表达及其基因免疫的研究[J]. 吴兴安,于澜,胡刚,张芳琳,白文涛,史梦远,徐志凯. 细胞与分子免疫学杂志. 2005(04)
[7]口蹄疫病毒O/China/99株VP1基因植物种子特异性表达载体的构建及农杆菌的导入[J]. 潘丽,张永光,王永录,王宝琴,王文秀,方玉珍,蒋守田,王炜,孙元,谢庆阁. 中国兽医科技. 2005(06)
[8]汉滩病毒G1重组腺病毒的表达及其免疫学特性研究[J]. 吴兴安,于澜,胡刚,张芳琳,白文涛,史梦远,王海涛,刘勇,徐志凯. 科学技术与工程. 2005(07)
[9]抗汉滩病毒单抗3G1 scFv植物表达载体的构建[J]. 罗雯,张九东,白文涛,吴兴安,胡刚,张芳琳. 西安联合大学学报. 2004(05)
[10]农杆菌介导的烟草高效遗传转化体系研究[J]. 张宁,王蒂. 甘肃农业科技. 2004(09)
本文编号：3105094
【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：82 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pBI121载体Fig1-1ThemapofthepBI121vector
图 1-2 pCAMBIA2301 载体Fig 1-2 The map of the pCAMBIA2301 vector酶DNA聚合酶购自MBI公司TaKaRa公司。DNA限制性内切酶接酶等主要分子生物学试剂购自TaKaRa公司。试剂盒小量质粒提取试剂盒购自博大泰克公司。DNA纯化试剂盒（CONCERTTMRapid Gel Extraction Systemo公司。缓冲液及试剂的配制菌培养基 LB 培养液：1%Tryptone （Oxide LTD），0.5%Yeast Extrac
图 2 SP- 3G1VH 片段的 PCR 扩增结果 2 PCR amplification of SP- 3G1VH fra：DNA Marker；2, 3, 4：Amplified prod1 2bp20001000900750500250100图 3 CH 片段的 PCR 扩增结果3 PCR amplification of CH fragmentDNA Marker；2：Amplified product
【参考文献】：
期刊论文
[1]抗汉坦病毒单链抗体基因向拟南芥遗传转化的初步研究[J]. 罗雯,吴兴安,李莺,徐志凯. 中国人兽共患病学报. 2007(12)
[2]沈阳市皇姑区流行性出血热流行特征分析[J]. 崔景义,杜娟,杨杰. 基层医学论坛. 2007(06)
[3]根癌农杆菌转化条件优化的研究[J]. 罗雯,刘阳. 生物技术. 2006(01)
[4]热带地区拟南芥栽培技术及基因转化体系的构建[J]. 李啸浪,胡新文,刘晓丽,郭建春. 热带作物学报. 2005(03)
[5]影响根癌农杆菌的电击转化条件[J]. 匡小婴,饶志明,沈微,方惠英,诸葛健. 食品与生物技术学报. 2005(04)
[6]汉滩病毒G2重组腺病毒的表达及其基因免疫的研究[J]. 吴兴安,于澜,胡刚,张芳琳,白文涛,史梦远,徐志凯. 细胞与分子免疫学杂志. 2005(04)
[7]口蹄疫病毒O/China/99株VP1基因植物种子特异性表达载体的构建及农杆菌的导入[J]. 潘丽,张永光,王永录,王宝琴,王文秀,方玉珍,蒋守田,王炜,孙元,谢庆阁. 中国兽医科技. 2005(06)
[8]汉滩病毒G1重组腺病毒的表达及其免疫学特性研究[J]. 吴兴安,于澜,胡刚,张芳琳,白文涛,史梦远,王海涛,刘勇,徐志凯. 科学技术与工程. 2005(07)
[9]抗汉滩病毒单抗3G1 scFv植物表达载体的构建[J]. 罗雯,张九东,白文涛,吴兴安,胡刚,张芳琳. 西安联合大学学报. 2004(05)
[10]农杆菌介导的烟草高效遗传转化体系研究[J]. 张宁,王蒂. 甘肃农业科技. 2004(09)
本文编号：3105094
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