miR-145通过调节单核巨噬细胞增殖/凋亡平衡参与调控慢性炎症过程

发布时间：2021-03-31 08:05

　　第一部分miR-145调控单核巨噬细胞的增殖和凋亡目的：研究miR-145对单核巨噬细胞增殖和凋亡的调控作用。方法：THP-1和HEK 293细胞分别转染了miR-145前体和抑制剂后,运用XTT、细胞生长曲线的方法检测细胞增殖活力,运用TUNEL染色、Bax染色检测细胞凋亡情况。分离OPG基因剔除小鼠骨髓单个核细胞,转染miR-145前体或抑制剂,运用XTT、Annex in V/PI染色检测细胞增殖和凋亡情况,以Western blotting检测过表达或抑制miR-145后细胞增殖（cyclin B1、cyclin D3、CDK4）和凋亡相关蛋白（Bax、caspase-9、caspase-3、Bcl-2、PARP）的变化。结果：细胞转染miR-145前体后,细胞增殖活力下降,增殖受抑制,而细胞凋亡明显增加。而内源性miR-145受抑制后,细胞增殖活力增加,凋亡明显受抑制。结论：miR-145参与调控单核巨噬细胞的增殖和凋亡。第二部分miR-145参与调控代谢性炎症过程目的：明确miR-145在糖尿病代谢性炎症过程中的作用。方法：C57BL/6J小鼠颈静脉插管后随机分为三组,连续... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：96 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

转染miR--145前体或抑制剂后份G变化

乙2﹄qOEnUDay3.OPG完全剔除后，miR一145对细胞增殖活力的影响(图3C)为了进一步确定miR一145抑制增殖的作用是否完全通过OPG，我们分离了OPG基因剔除小鼠的骨髓单个核细胞，电穿孔转染了miR一145的前体，结果发现miR一145仍然明显抑制细胞的增殖活力，但是与正常小鼠相比，这种抑制作用相对较弱，这说明miR一145抑制细胞增殖的作用部分通过下调OPG表达实现。C1oo~7Uo猫邀一巴日%d︾uo匀班巴=0﹄ d025乏乏8 ConPr..而R·145opG.I+(Cs7aU6)C加P找卜而R一 146ConP的6.而R一145opG今气叼12。)opG一饰一ce

甸 clinD3ACtinCOK4ACtin四、miR一145促进细胞凋亡1.TUNEL法检测细胞凋亡(图4A、B)转染miR一145抑制剂或前体后，用TUNEL法检测细胞凋亡情况，结果显示过表达miR一145后，阳性染色细胞增多，说明细胞凋亡增加，而抑制内源性miR一145后，细胞凋亡明显减少，加入OPG细胞因子可以部分逆转miR一145的促凋亡作用。


本文编号：3111098