丹蒲胶囊对EAP模型大鼠疼痛因子的影响的研究

发布时间：2017-04-16 17:14

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【摘要】：慢性前列腺炎(Chronic Prostatitis, CP)是成年男性常见疾病之一,临床主要表现为慢性盆腔疼痛,由于其发病机制尚不明确,目前很多治疗对盆腔疼痛缓解远期效果不佳。关于CP的发病机制有多种学说,但是每一种学说都不能完全解释CP发病机制及其发展变化过程,目前主要侧重于多元学说：感染因素、免疫因素、内分泌因素及精神心理因素等多种因素共同作用相互影响而成。随着分子生物学及免疫学的发展,免疫学说逐渐成为基础研究的重点。 中医药凭借着独特疗效在治疗CP方面有着一定的优势。我国著名中西医结合泌尿外科专家刘献枋教授自上个世纪六十年代开始,根据临床上CP患者多表现为下腹、腰骶、会阴等部位疼痛,以及前列腺触诊多呈硬化改变及前列腺压痛等症状,这种症状表现符合中医血瘀证,结合CP病理改变为腺腔梗阻,腺液滞留,间质纤维化等特点,将宏观辨证与微观辨证相结合,研制而成前列腺汤,后刘教授为便于研究此处方及减轻药物对胃肠道刺激,便简化处方取其中6味,组方丹蒲胶囊。 导师张亚强主任医师继承了刘猷枋教授学术思想,承担国家“七五”攻关课题、国家自然科学基金课题、北京市自然基金课题、国家中医药管理局课题,通过大量的临床研究和动物实验对丹蒲胶囊进行了深入的研究。丹蒲胶囊的临床试验显示其能够明显改善CP患者的盆腔疼痛临床症状,提高生活质量。基础动物实验发现其治疗CP是通过调节免疫作用。但是丹蒲胶囊能改善慢性盆腔疼痛症状的机理不是特别明确,本实验通过制作改良的实验性自身免疫性前列腺炎(Experimental autoimmune prostatitis EAP)大鼠模型,对引起慢性盆腔疼痛综合征(Chronic Pelvic Pain Syndrome CPPS)的相关疼痛因子研究,进一步揭示丹蒲胶囊的治疗机制。 目的：探索EAP动物模型的制作方法,通过研究丹蒲胶囊对改良的EAP模型大鼠疼痛因子神经生长因子(Nerve Growth Factor NGF)、白介素-6(IL-6Interleukin-6)及p-内啡肽(p-endorphinp-EP)的影响,揭示丹蒲胶囊改善CPPS的机制。 方法：采用纯化大鼠前列腺蛋白与完全弗氏佐剂的匀浆注射前列腺联合不完全弗氏佐剂皮下注射加强免疫法建立EAP大鼠模型,将大鼠随机分为丹蒲胶囊高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性药物组、模型组、正常组,给药8周后处死大鼠,取血及前列腺组织,光镜下观察各组动物前列腺组织形态学变化,酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay ELISA)检测血清及前列腺组织NGF、IL-6及β-EP水平.实时逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)法测定NGF-mRNA、IL-6-mRNA表达水平。 结果： 1、ELISA法测定NGF表达水平结果显示：模型组血清和前列腺组织中NGF表达水平明显增高,与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01)；药物治疗后,丹蒲胶囊高剂量、阳性药物组的血清及前列腺组织NGF表达水平明显低于模型组,差异均有统计学意义(P0.01)；丹蒲胶囊低剂量组与模型组比较,血清及前列腺组织NGF表达水平差异均无统计学意义(P0.05)。 2、ELISA法测定p-EP表达水平结果显示：模型组血清和前列腺组织中p-EP表达水平明显降低,与正常比较,差异有统计学意义(P0.01)；药物治疗后,丹蒲胶囊高剂量、中剂量、阳性药物组的血清及前列腺组织p-EP表达水平明显高于模型组,差异均有统计学意义(P0.01)；丹蒲胶囊低剂量组与模型组比较,血清及前列腺组织β-EP表达水平差异均无统计学意义(P0.05)。 3、ELISA法测定组织IL-6表达水平结果显示：模型组表达水平明显降低,与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01)；药物治疗后,丹蒲胶囊高剂量、阳性药物组的表达水平明显高于模型组,差异均有统计学意义(P0.01)；而血清IL-6任意两组之间比较差异均没有统计学意义(P0.05)。 4、RT-PCR法测定IL-6-mRNA、NGF-mRNA结果显示：模型组前列腺组织中IL-6-mRNA的CT值升高、NGF-mRNA的CT值降低,与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01)；药物治疗后,丹蒲胶囊高剂量、阳性药物组的前列腺组织IL-6-mRNA的CT值明显低于模型组,NGF-mRNA的CT值明显高于模型组,差异均有统计学意义(P0.01)；丹蒲胶囊低剂量组与模型组比较,前列腺组织IL-6-mRNA.NGF-mRNA的CT值差异均无统计学意义(P0.05)。 结论： 1、采用纯化大鼠前列腺蛋白与完全弗氏佐剂的匀浆注射前列腺联合不完全弗氏佐剂皮下注射加强免疫法成功建立实验性自身免疫性前列腺炎大鼠模型。 2、丹蒲胶囊能够缓解CPPS,其机制可能与其抑制NGF表达、增加IL-6及β-EP表达有关。 3、血清IL-6表达各组之间没有差异,而组织中IL-6表达可见与其他疼痛因子表现出类似的结果,表明前列腺炎症局部IL-6的变化可能并不与血清IL-6相关,IL-6的作用可能是局部组织细胞分泌的结果。 4、使用药物治疗后可以升高组织IL-6,这一点与血清及组织中p-EP类似,而NGF水平均降低,可见疼痛程度可能与IL-6及p-EP的表达水平成负相关,与NGF成正相关。 5、丹蒲胶囊(高剂量)和阳性药物组均未能使模型指标恢复正常,其原因可能与治疗周期时间较短有关。
【关键词】：慢性前列腺炎 细胞因子 实验性自身免疫性前列腺炎 丹蒲胶囊 慢性盆腔疼痛
【学位授予单位】：中国中医科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R277.5
【目录】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 缩略词表12-13
• 前言13-17
• 第一部分 文献综述17-29
• 一 中医药对慢性前列腺炎的相关细胞因子研究17-23
• 1 中药治疗对细胞因子的影响17-20
• 2 针灸对细胞因子的影响20
• 3 外治法对细胞因子的影响20-21
• 4 讨论21-23
• 二 前列腺炎动物模型研究进展23-29
• 1 细菌性前列腺炎模型23-24
• 1.1 急性细菌性前列腺炎模型23-24
• 1.2 慢性细菌性前列腺炎模型24
• 2 非细菌性慢性前列腺炎模型24-27
• 2.1 化学物质注射前列腺诱导的模型24-25
• 2.2 性激素诱导的模型25-26
• 2.3 免疫佐剂诱导的模型26-27
• 3 讨论27-29
• 第二部分 实验研究29-54
• 1 材料29-30
• 1.1 动物29
• 1.2 主要仪器设备29
• 1.3 主要试剂29-30
• 1.4 药物30
• 2 方法30-38
• 2.1 抗原制备30-31
• 2.2 动物分组及造模31-32
• 2.3 给药方法32
• 2.4 动物取材32
• 2.5 检测方法32-37
• 2.6 统计学处理37-38
• 3 结果38-49
• 3.1 前列腺组织标本HE染色结果分析38-40
• 3.2 ELISA测定组织及前列腺组织疼痛因子水平变化40-46
• 3.3 RT-PCR测定组织中疼痛因子水平变化46-49
• 4 讨论49-53
• 4.1 慢性前列腺炎的中西医病因49
• 4.2 丹蒲胶囊的组方来源及现代研究49-51
• 4.3 疼痛因子NGF与慢性前列腺炎51
• 4.4 疼痛因子IL-6与慢性前列腺炎51-52
• 4.5 疼痛因子β-EP与慢性前列腺炎52-53
• 5 总结及展望53-54
• 参考文献54-59
• 致谢59-61
• 个人简历61

【参考文献】

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本文编号：311283