过表达核糖核酸酶抑制因子通过调节ILK/PI3K/AKT信号途径抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞体内外生长

发布时间：2021-04-02 20:14

　　核糖核酸酶抑制因子（ribonuclease inhibitor,RI）是胞浆内的一种酸性蛋白质.已有研究证明,RI与核糖核酸酶A（RNase A）和血管生成素（angiogenin,ANG）结合可抑制其活性.本室前期实验证实,RI可有效抑制某些肿瘤的生长和转移.然而,RI抑制肿瘤的分子机制尚不清楚.本研究探讨RI对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞生长和凋亡的影响及其机制.MTT法结合流式细胞术分析结果证明,RI基因稳定转染导致B16-F10黑色素瘤细胞S期阻滞,抑制B16-F10黑色素瘤细胞增殖.Annexin V/PI结合流式细胞术结果显示,RI过表达引起细胞凋亡.与此相一致,蛋白质印迹分析显示,过表达RI引起抗凋亡分子Bcl-2表达下调,而Bax上调,同时伴有Pro-casepase 3激活.C57BL/6小鼠移植成瘤实验显示,与对照相比,转染RI的B16-F10细胞形成的肿瘤重量显著减少,同时伴有肿瘤组织微血管密度降低.提示RI过表达能抑制微血管生成.此外,体内外组织/细胞免疫化学和蛋白质印迹结果揭示,过表达RI可显著抑制整合素连接激酶（integrin-linked kinas... 

【文章来源】：中国生物化学与分子生物学报. 2015,31(04)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1. 1 材料
    1. 2p IRES2-EGFP-RI 真核表达载体的 构 建 与 鉴定
    1. 3 黑色素瘤 B16-F10 细胞的培养及转染
    1. 4 RI 基因表达的检测
    1. 5 细胞免疫荧光检测
    1. 6 MTT 检测细胞的增殖
    1. 7 流式细胞术分析细胞周期及凋亡
    1. 8 TUNEL 及 Hochest 33342 检测细胞和肿瘤组 织凋亡
    1. 9 Western 印迹检测凋亡相关蛋白质及 ILK 信 号通路蛋白质的表达
    1. 10检测上调RI对B16-F10细胞生长、凋亡的影响
    1. 11 统计学分析
2 结果
    2. 1 重组质粒 p IRES2-EGFP-RI 的鉴定
    2. 2 B16-F10 细胞过表达 RI 的鉴定
    2. 3过表达 RI 对细胞增殖活力及细胞周期的 影响
    2. 4 过表达 RI 对细胞凋亡的影响
    2. 5 过表达 RI 对 ILK / PI3K / AKT 信号通路蛋白 质表达的影响
    2. 6过表达 RI 对黑色素瘤细胞小鼠移植瘤生长 和血管生成的影响
    2. 7 过表达 RI 对体内肿瘤组织 ILK / PI3K / AKT 信号通路蛋白质表达的影响
3 讨论



本文编号：3115889