日本血吸虫重组疫苗粘膜免疫的研究及新基因的克隆
发布时间：2021-04-03 04:04
目的：探讨日本血吸虫重组蛋白、核酸疫苗、重组链球菌活菌苗粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力及寻找新的疫苗侯选分子的基因。 方法： 1、核酸疫苗及重组链球菌活菌苗按常规方法构建。 2、保护试验用动物为BALB/C和昆明系小鼠。分别用rSjFer和rSjGST-CA（佐剂为CTB），SjTs-1/pc、Sj31/VR1012、SjCA/pc和SjMf1/pc（佐剂为MPL），SjCA和Sj31表面表达重组活菌苗粘膜免疫3次。第3次免疫后2周，攻击感染40±1条尾蚴，45 d剖杀动物，观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前尾静脉采血并收集粪便或唾液，ELISA检测抗体水平。 3、日本血吸虫成虫cDNA文库免疫筛选用血清为重复感染兔血清。三轮筛所获阳性克隆，经辅助噬菌体自动剪切后，进行PCR检测测序，生物信息学分析。 结果 1、小鼠免疫后血清中IgA和IgG及粪内或唾液内sIgA水平升高。rSjFer+CTB灌胃和滴鼻免疫的减虫率分别为25.57％和33.35％，每克肝减卵率分别为34.75％和60.10％。rSjGST-CA+CTB滴鼻免疫的减虫率为...
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
纯化的rsjFer的western一blotting鉴定结果
3念;界洛丛3娜脚丫妇图3M蛋白质标志物纯化的rSj’GST一CA的SDS一PAGE鉴定结果1rSj’GST一CA2bufferA中的上清3未加IPTG诱导的细菌裂解物4IPTG诱导后的细菌裂解物Fig.1SDS一PAGEanalysisofpurifiedrS’’GST一CAM.proteinmolecularweightstandards1.PartiallyPurifiedrSj’GST一CA2ThesuPe扭atantinbufferA3.BaeteriallysateunindueedbyIPTG.4BaeteriallysateindueedbyIPTG褪二重父_图4纯化的rSj’GST一CA和rS，’GST26的westem一blotting鉴定结果M.蛋白质标志物1.血吸虫感染血清与rSj’GST26孵育2.血吸虫感染血清与rS，’GsT一CA孵育3.阴性血清与rS，’GsT一cA孵育4.阴性血清与rSj’GST26孵育Fig.ZW七stem一blottinganalysisofrSj’GST一CAandrSj’GST26M.MarkerlrSj’GST一CAineubatedwithserafrommieeinfeeted初th5.j2
昨3澳念;界3物纯化的rSj’GST一CA的SDS一PAGE鉴定结1rSj’GST一CA2bufferA中的上清导的细菌裂解物4IPTG诱导后的细菌裂解PAGEanalysisofpurifiedrS’’GST一CAM.prote1.PartiallyPurifiedrSj’GST一CA2ThesuPe扭lysateunindueedbyIPTG.4Baeteriallysateinduee
【参考文献】：
期刊论文
[1]日本血吸虫Mf1和胞质氨基肽酶基因的亚克隆表达与免疫保护效果测定[J]. 王庆林,易新元,曾宪芳,罗新松,何永康,彭兴华,Larry Me Reynolds. 中国人兽共患病杂志. 2003(02)
[2]重组日本血吸虫铁蛋白粘膜免疫诱导小鼠保护力的研究[J]. 黄复深,易新元,曾宪芳,罗秀菊,张顺科,蔡春. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2003(01)
[3]动物黏膜免疫细胞研究进展[J]. 董玉兰,王树迎. 动物医学进展. 2003(01)
[4]微小隐孢子虫CP15/60-DNA滴鼻免疫小鼠诱导的粘膜与系统免疫反应[J]. 何宏轩,张西臣,尹继刚,李建华,杨举. 中国农业大学学报. 2002(05)
[5]血吸虫核酸疫苗研究进展[J]. 李德发. 中国血吸虫病防治杂志. 2002(04)
[6]日本血吸虫三个新跨膜蛋白基因的克隆和分析[J]. 周东明,易新元,曾宪芳,曾庆仁,周金春,王敏,张顺科,黄复深. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2001(06)
[7]日本血吸虫卵黄铁蛋白基因免疫小鼠的保护性研究[J]. 周俊梅,余新炳,吴忠道,郑亦男,卞国武. 中国血吸虫病防治杂志. 2001(06)
[8]噬菌体表达短肽模拟旋毛虫抗原表位及其抗血吸虫保护性免疫研究[J]. 周东明,易新元,曾宪芳,王敏,Larry McReynolds. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2001(05)
[9]DNA疫苗在小鼠体内的组织分布及安全性研究[J]. 魏泉德,叶苓,徐劲,余新炳:. 中国人兽共患病杂志. 2001(05)
[10]东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库[J]. 王庆林,易新元,曾宪芳,周金春,罗新松,何永康,彭兴华. 中国生物化学与分子生物学报. 2001(05)
本文编号：3116580
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
纯化的rsjFer的western一blotting鉴定结果
3念;界洛丛3娜脚丫妇图3M蛋白质标志物纯化的rSj’GST一CA的SDS一PAGE鉴定结果1rSj’GST一CA2bufferA中的上清3未加IPTG诱导的细菌裂解物4IPTG诱导后的细菌裂解物Fig.1SDS一PAGEanalysisofpurifiedrS’’GST一CAM.proteinmolecularweightstandards1.PartiallyPurifiedrSj’GST一CA2ThesuPe扭atantinbufferA3.BaeteriallysateunindueedbyIPTG.4BaeteriallysateindueedbyIPTG褪二重父_图4纯化的rSj’GST一CA和rS，’GST26的westem一blotting鉴定结果M.蛋白质标志物1.血吸虫感染血清与rSj’GST26孵育2.血吸虫感染血清与rS，’GsT一CA孵育3.阴性血清与rS，’GsT一cA孵育4.阴性血清与rSj’GST26孵育Fig.ZW七stem一blottinganalysisofrSj’GST一CAandrSj’GST26M.MarkerlrSj’GST一CAineubatedwithserafrommieeinfeeted初th5.j2
昨3澳念;界3物纯化的rSj’GST一CA的SDS一PAGE鉴定结1rSj’GST一CA2bufferA中的上清导的细菌裂解物4IPTG诱导后的细菌裂解PAGEanalysisofpurifiedrS’’GST一CAM.prote1.PartiallyPurifiedrSj’GST一CA2ThesuPe扭lysateunindueedbyIPTG.4Baeteriallysateinduee
【参考文献】：
期刊论文
[1]日本血吸虫Mf1和胞质氨基肽酶基因的亚克隆表达与免疫保护效果测定[J]. 王庆林,易新元,曾宪芳,罗新松,何永康,彭兴华,Larry Me Reynolds. 中国人兽共患病杂志. 2003(02)
[2]重组日本血吸虫铁蛋白粘膜免疫诱导小鼠保护力的研究[J]. 黄复深,易新元,曾宪芳,罗秀菊,张顺科,蔡春. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2003(01)
[3]动物黏膜免疫细胞研究进展[J]. 董玉兰,王树迎. 动物医学进展. 2003(01)
[4]微小隐孢子虫CP15/60-DNA滴鼻免疫小鼠诱导的粘膜与系统免疫反应[J]. 何宏轩,张西臣,尹继刚,李建华,杨举. 中国农业大学学报. 2002(05)
[5]血吸虫核酸疫苗研究进展[J]. 李德发. 中国血吸虫病防治杂志. 2002(04)
[6]日本血吸虫三个新跨膜蛋白基因的克隆和分析[J]. 周东明,易新元,曾宪芳,曾庆仁,周金春,王敏,张顺科,黄复深. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2001(06)
[7]日本血吸虫卵黄铁蛋白基因免疫小鼠的保护性研究[J]. 周俊梅,余新炳,吴忠道,郑亦男,卞国武. 中国血吸虫病防治杂志. 2001(06)
[8]噬菌体表达短肽模拟旋毛虫抗原表位及其抗血吸虫保护性免疫研究[J]. 周东明,易新元,曾宪芳,王敏,Larry McReynolds. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2001(05)
[9]DNA疫苗在小鼠体内的组织分布及安全性研究[J]. 魏泉德,叶苓,徐劲,余新炳:. 中国人兽共患病杂志. 2001(05)
[10]东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库[J]. 王庆林,易新元,曾宪芳,周金春,罗新松,何永康,彭兴华. 中国生物化学与分子生物学报. 2001(05)
本文编号：3116580
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