一种纤溶酶SPFE-Ⅲ的生物制备、分离纯化及酶学性质研究
发布时间：2021-04-08 12:37
血栓栓塞性疾病主要包括脑血栓、心肌梗死、静脉血栓等,是目前临床上死亡率最高的疾病之一,并且在世界范围内的发病率正逐年上升,因此人们一直都在研制开发新型的溶血栓药物。本文从亚洲传统发酵食品——虾酱中筛选到一株产纤溶酶能力较强的菌株,由中国典型培养物保藏中心定名为Bacillus sp.nov.SK006（CCTCC NO.:M 205071）,已经证明该菌株能产生四种不同的纤溶酶,本文在优化该菌产酶条件的基础上,主要对芽孢杆菌Bacillus sp.nov.SK006产生的其中一种纤溶酶（SPFE-Ⅲ）作了深入的研究。首先在摇瓶水平上考察了培养基组成及培养条件对Bacillus sp.nov.SK006发酵产纤溶酶能力的影响,结果表明该菌株产酶最佳的培养基组分为:葡萄糖20 g/L,胰蛋白胨30g/L,Na2HPO4·12H2O 15g/L,NaH2PO4·2H2O 1.3g/L,MgSO4·7H2O 0.5g/L...
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
为纯化后的酶，
图3名纤溶机制的研究Fig.3名 ThemeehanismofFibrinolytieEnzymesSpFE一I将纯化后的酶稀释成不同浓度后，分别在阳性纤维蛋白平板(如图3名中的b)和加热过的阴性纤维蛋白平板(如图3名中的a)上检测纤溶活性，以此判断纤溶酶SPFE一I溶解纤维蛋白的作用方式。结果如图3名所示:结果发现纤溶酶SPFE一I在两种平板上的溶栓透明圈直径几乎相同，即两种方法测得的酶活几乎相同;这表明该纤溶酶SPFE一I对纤维蛋白有直接降解作用，而目前报道的尿激酶和纳豆激酶不但能直接溶解纤维蛋白而且能激活纤溶酶原转变成纤溶酶，因此，与这两种纤溶酶对纤维蛋白的作用方式是不同的。从豆豉发现的QK一1和QK一并不能激活纤维酶原1100]，它们也是通过直接降解纤维蛋白发挥溶栓作用的，纤溶酶sPFE一I和QK在对纤维蛋白的作用方式上相同。3.3.4.2纤溶酶SPFE一I对纤维蛋白的降解过程的研究纤维蛋白原(人礴衍卜纤维蛋白单体(.街》凝血醉原一凝血酶!纤维蛋白多体(。御)矛{+纤维蛋白肤^(FA){:十纤维蛋白肚B作B)}(可溶)纤维蛋白稳定因子X扭交联的纤维蛋白多体(不溶)(，街2)P图3刁纤维蛋白形成示意图Fig.3刁 Forrnationoffibrin纤维蛋白原的分子是由三对两两相同的肤链(称为a链 63.5kDa)、p链(56切a)和Y链 (47kDa)组成的二聚体
江南大学{吹1学位论文将纤维蛋白的形成机制总结归纳如图3刁所示，纤维蛋白是分子结构没有发生根本变化的纤维蛋白原的多聚物，纤维蛋白单体借助氢健和疏水键聚合为可溶性的不稳定的纤维蛋白多聚体后，再经凝血因子xma转酞胺(由凝血酶激活因子xlll(纤维蛋白稳定因子)产生)反应和ca2+的作用，使多聚体内分子间形成共价键，以Y，二聚体和a一多聚体方式交联，成为稳定的不溶性纤维蛋白。纤溶酶对纤维蛋白和纤维蛋白原的降解产物基本相同，无突出的新片断出现，因为纤维蛋白原比纤维蛋白的溶解度高
【参考文献】：
期刊论文
[1]豆豉纤溶酶生产菌发酵液营养和活性成分分析[J]. 王卫东,孙月娥. 现代食品科技. 2006(02)
[2]豆豉纤溶酶产生菌发酵条件研究[J]. 吴思方,向梅,陶琳,孟凡涛. 中国医药工业杂志. 2004(06)
[3]高活性豆豉纤溶酶产生菌出发菌株的筛选[J]. 齐海萍,钱和,王璋,许时婴. 中国调味品. 2004(02)
[4]纳豆菌的分离鉴定及其抗菌活性[J]. 钟青萍,谢俊杰,余世望. 食品科学. 2002(10)
[5]枯草杆菌DC-2纳豆激酶基因的克隆及其融合蛋白在E.coli中的表达[J]. 彭勇,黄庆,张义正. 中国生物化学与分子生物学报. 2002(05)
[6]纳豆激酶基因在E.coli HB101中的初步表达研究[J]. 罗立新,黄志立,杨汝德,凌均建,梁世中. 微生物学通报. 2002(03)
[7]折多山纳豆生产菌株的分离与筛选[J]. 陈波,贺新生,张玲. 食品与发酵工业. 2002(05)
[8]纳豆激酶酶原基因和纳豆激酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达[J]. 余榕捷,汪炬,谢秋玲,洪岸. 生物技术. 2002(03)
[9]纳豆激酶基因的克隆及其在枯草杆菌中的表达[J]. 刘北域,宋后燕. 生物化学与生物物理学报. 2002(03)
[10]解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）DC-4产豆豉溶栓酶发酵条件的优化[J]. 彭勇,张义正. 食品与发酵工业. 2002(04)
本文编号：3125567
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
为纯化后的酶，
图3名纤溶机制的研究Fig.3名 ThemeehanismofFibrinolytieEnzymesSpFE一I将纯化后的酶稀释成不同浓度后，分别在阳性纤维蛋白平板(如图3名中的b)和加热过的阴性纤维蛋白平板(如图3名中的a)上检测纤溶活性，以此判断纤溶酶SPFE一I溶解纤维蛋白的作用方式。结果如图3名所示:结果发现纤溶酶SPFE一I在两种平板上的溶栓透明圈直径几乎相同，即两种方法测得的酶活几乎相同;这表明该纤溶酶SPFE一I对纤维蛋白有直接降解作用，而目前报道的尿激酶和纳豆激酶不但能直接溶解纤维蛋白而且能激活纤溶酶原转变成纤溶酶，因此，与这两种纤溶酶对纤维蛋白的作用方式是不同的。从豆豉发现的QK一1和QK一并不能激活纤维酶原1100]，它们也是通过直接降解纤维蛋白发挥溶栓作用的，纤溶酶sPFE一I和QK在对纤维蛋白的作用方式上相同。3.3.4.2纤溶酶SPFE一I对纤维蛋白的降解过程的研究纤维蛋白原(人礴衍卜纤维蛋白单体(.街》凝血醉原一凝血酶!纤维蛋白多体(。御)矛{+纤维蛋白肤^(FA){:十纤维蛋白肚B作B)}(可溶)纤维蛋白稳定因子X扭交联的纤维蛋白多体(不溶)(，街2)P图3刁纤维蛋白形成示意图Fig.3刁 Forrnationoffibrin纤维蛋白原的分子是由三对两两相同的肤链(称为a链 63.5kDa)、p链(56切a)和Y链 (47kDa)组成的二聚体
江南大学{吹1学位论文将纤维蛋白的形成机制总结归纳如图3刁所示，纤维蛋白是分子结构没有发生根本变化的纤维蛋白原的多聚物，纤维蛋白单体借助氢健和疏水键聚合为可溶性的不稳定的纤维蛋白多聚体后，再经凝血因子xma转酞胺(由凝血酶激活因子xlll(纤维蛋白稳定因子)产生)反应和ca2+的作用，使多聚体内分子间形成共价键，以Y，二聚体和a一多聚体方式交联，成为稳定的不溶性纤维蛋白。纤溶酶对纤维蛋白和纤维蛋白原的降解产物基本相同，无突出的新片断出现，因为纤维蛋白原比纤维蛋白的溶解度高
【参考文献】：
期刊论文
[1]豆豉纤溶酶生产菌发酵液营养和活性成分分析[J]. 王卫东,孙月娥. 现代食品科技. 2006(02)
[2]豆豉纤溶酶产生菌发酵条件研究[J]. 吴思方,向梅,陶琳,孟凡涛. 中国医药工业杂志. 2004(06)
[3]高活性豆豉纤溶酶产生菌出发菌株的筛选[J]. 齐海萍,钱和,王璋,许时婴. 中国调味品. 2004(02)
[4]纳豆菌的分离鉴定及其抗菌活性[J]. 钟青萍,谢俊杰,余世望. 食品科学. 2002(10)
[5]枯草杆菌DC-2纳豆激酶基因的克隆及其融合蛋白在E.coli中的表达[J]. 彭勇,黄庆,张义正. 中国生物化学与分子生物学报. 2002(05)
[6]纳豆激酶基因在E.coli HB101中的初步表达研究[J]. 罗立新,黄志立,杨汝德,凌均建,梁世中. 微生物学通报. 2002(03)
[7]折多山纳豆生产菌株的分离与筛选[J]. 陈波,贺新生,张玲. 食品与发酵工业. 2002(05)
[8]纳豆激酶酶原基因和纳豆激酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达[J]. 余榕捷,汪炬,谢秋玲,洪岸. 生物技术. 2002(03)
[9]纳豆激酶基因的克隆及其在枯草杆菌中的表达[J]. 刘北域,宋后燕. 生物化学与生物物理学报. 2002(03)
[10]解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）DC-4产豆豉溶栓酶发酵条件的优化[J]. 彭勇,张义正. 食品与发酵工业. 2002(04)
本文编号：3125567
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