原核表达的轮状病毒双层病毒样颗粒理化性质的鉴定及其免疫保护性的初步评价

发布时间：2021-04-11 10:38

　　A组轮状病毒是引起婴幼儿腹泻的主要病原体,全球每年由于轮状病毒感染导致的死亡约453,000人,造成严重的社会负担和经济负担。安全、有效的疫苗是控制轮状病毒感染和发病的重要手段。目前已有两种轮状病毒口服疫苗经FDA批准上市,分别为默克的RotateqTM和葛兰素史克的RotarixTM,但在亚州与非州等轮状病毒高负担地区的保护率显著低于欧美等发达国家和地区,且二者作为减毒活疫苗均存在一定的安全风险。因此,开发一种更加安全、有效的疫苗对控制轮状病毒的感染与发病,特别是严重腹泻和死亡具有重要意义。基因工程表达的病毒样颗粒疫苗被认为是一种较为理想的轮状病毒候选疫苗,但目前轮状病毒病毒样颗粒的大规模制备还存在一定的挑战。在本人硕士阶段和本团队其他人员的研究中,我们已经在大肠杆菌中成功表达轮状病毒的结构蛋白VP2和VP6,并在体外成功的组装了病毒样颗粒VP6-VLP和VP2/6-VLP。本研究主要对原核表达的VP6、VP6-VLP和dl2/6-VLP的理化性质和免疫保护性进行研究,综合考察其作为轮状病毒候选疫苗的可行性。首先,通过比较与15株由天然病毒免疫制备的单克隆抗体的反应性发现,dl2/6... 

【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：139 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１轮状病毒结构示意图Ｈｌ??Ｆｉｇ．?１?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｒｏｔａｖｉｒｕｓ??

发生相互作用，其复制酶活性需要ＶＰ２蛋白的参与［７，８］，转录酶活性需要ＶＰ６蛋白??的参与［９］。??ＶＰ２是主要的核心蛋白，在结构上以ａ螺旋为主（图２），由ＶＰ２Ａ和ＶＰ２Ｂ形??成不对称的二聚体进而组装形成Ｔ＝１的病毒核心颗粒［１（）］。ＶＰ２为核酸结合蛋白，研??究表明，１？９２ａａ与其核酸结合能力密切相关，Ｎ端缺失９２ａａ的ＶＰ２蛋白不具有核??酸结合能力［１１１，也不能与ＶＰ１和ＶＰ３发生相互作用［１２］，但仍能组装形成病毒样颗??粒，且将其替换成ＤｓＲｅｄ或轮状病毒的ＶＰ８蛋白也均不影响ＶＰ２病毒样颗粒的组??装［１３］。??ＶＰ１和ＶＰ３均位于ＶＰ２五倍轴的顶点［１４］，?ＶＰ３为核酸结合蛋白，但其只能识??另ｉＪｓｓＲＮＡ，且对序列无严格要求，此外，ＶＰ３还具有鸟苷酸转移酶活性［｜５１和甲基转??移酶活性［１６］，为ＲＮＡ加帽。??Ａ?ｎｅｉｇｈｂｏｒｉｎｇ?ｍｏｎｏｍｅｒｓ?ｂ??（ｍｓ

ｒＶ轮状病毒蛋白总量的５０％以上，是轮状病毐分组的依据［１７］。ＶＰ６蛋白由两个结构??域构成，分别为由１？１５０?ａａ和３３５？３９７?ａａ构成的Ｂ结构域和由１５１？３３４?ａａ构成的??Ｈ结构域，其中Ｂ结构域以ａ螺旋为主，Ｈ结构域以｜３折叠为主（图３）?［１８１。在天??然病毒中，ＶＰ６以三聚体的形式存在，Ｈ结构域和Ｂ结构域均参与三聚体的形成，??但Ｈ结构域间的相互作用以疏水相互作用为主，是维持ＶＰ６三聚体稳定的主嬰因??素，这与缺火突变的结果是一致的，ｌｆｎ２５Ｋ３９７?ａａ是ＶＰ６蛋白组装形成病毒样颗粒??的必需区域１１９，２（）］。在体外，单独的ＶＰ６也可以组装形成球状或管状颗粒，其形态与??ｐＨ和离子强度密切相关［２１］。??ＶＰ６蛋白介于病毐的核心和外衣壳之间，在轮状病毐的组装中发挥着重要的作??用。ＶＰ６蛋白与ＶＰ２相互作用的区域主要位于６５？７１?ａａ，与ＶＰ２之间主要是疏水??相互作用（图３），且ＶＰ６与ＶＰ２的相互作用是轮状病毐转录酶活性所必霈的Ｈ。??ＶＰ６与ＶＰ７相互作用的区域位于２７１？３４２?ａａ

【参考文献】：
期刊论文
[1]人轮状病毒实验感染成年树鼩的研究(摘要)[J]. 万新邦,庞其方,丘福禧,胥爱源,张胜泉.  医学研究通讯. 1982(03)

硕士论文
[1]轮状病毒结构蛋白在大肠杆菌中的表达及其类病毒颗粒的体外组装[D]. 李廷栋.厦门大学 2009



本文编号：3131101