小鼠心脏干/祖细胞亚群的分离与鉴定

发布时间：2021-04-11 18:55

　　目的：心脏向来被认为自出生后即是一个终末分化器官而缺乏自我更新与再生能力,但心脏干／祖细胞（cardiac stem/progenitor cells, CSC/CPCs）的发现颠覆了这一传统观念。迄今,已从人类等多种哺乳动物心脏中成功分离得到了CSC/CPCs。体内、体外实验表明,CSC/CPCs具有形成心肌细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞的能力,在维持心脏自稳态和损伤修复中起关键作用。目前已报道了多种类型的CSC/CPCs,提示心脏组织中可能存在功能各异的CSC/CPCs.本文的目的是：利用实验动物C57BL/6J小鼠,通过细胞生物学和分子生物学等手段,系统地研究CSC/CPCs细胞成分的构成,旨在筛选和鉴定出可能的新的CSC/CPCs亚型,为深入了解CSC/CPCs及其临床应用奠定基础。方法：1)小鼠心脏细胞的分离与制备：断颈处死小鼠,取心脏,冲洗残留血液,剪碎至1-2mm3,胶原酶Ⅱ消化25min,细胞筛过滤,制备成心脏单细胞悬液。2)细胞表型分析与分选：新鲜分离细胞与系列抗表面标志蛋白荧光抗体组合孵育后,通过流式细胞分析仪分析心脏细胞表型及含量,通过流式细胞分选仪分选纯化潜在的... 

【文章来源】：广西师范大学广西壮族自治区

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第1章 前言
    1.1 心脏干/祖细胞的发现、类型及发育起源
        1.1.1 心脏干/祖细胞的发现
        1.1.2 心脏干/祖细胞的类型
        1.1.3 心脏干/祖细胞的发育起源
    1.2 心脏干/祖细胞的分离与鉴定方法
    1.3 心脏干/祖细胞在临床应用的前景与存在问题
        1.3.1 心脏干/祖细胞在临床应用的前景
        1.3.2 存在问题
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要实验试剂与耗材
        2.1.3 主要试剂与溶液的配制
        2.1.4 仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠心脏细胞的分离
        2.2.2 小鼠心脏细胞的流式分析
        2.2.3 小鼠心脏干细胞的流式分选
        2.2.4 细胞免疫荧光分析
        2.2.5 RT-PCR检测基因表达
-CD45^-Sca-1⁺CD31⁺细胞的扩增培养">        2.2.6 小鼠Lin^-CD45^-Sca-1⁺CD31⁺细胞的扩增培养
        2.2.7 小鼠心脏细胞周期分析
        2.2.8 统计方法
第3章 实验结果
    3.1 小鼠心脏干/祖细胞表型分析
        3.1.1 小鼠心脏干/祖细胞表型流式分析
        3.1.2 小鼠心脏干/祖细胞免疫荧光分析
    3.2 心脏特异性基因表达
-CD45^-Sca-1⁺CD31⁺细胞的体外扩增">    3.3 小鼠心脏Lin^-CD45^-Sca-1⁺CD31⁺细胞的体外扩增
-CD45^-Sca-1⁺CD31⁺细胞的细胞周期检测">    3.4 小鼠心脏Lin^-CD45^-Sca-1⁺CD31⁺细胞的细胞周期检测
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
英文缩写一览表
致谢



本文编号：3131781