RERG基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备

发布时间：2021-04-14 10:12

　　目的:为了制备抗体效价高、特异性好,可有效满足RERG基因（Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor）上蛋白的相关测定,填补RERG多克隆抗体的研究空白。方法:试验使用已经在实验室中克隆的RERG基因序列用于原核表达载体,构建原核表达载体pET32a-RERG;随后进行RERG蛋白的原核表达;完成RERG蛋白的纯化以及大白兔RERG多克隆抗体的制备与纯化。结果:通过Western-blot鉴定发现RERG的目的条带单一;使用ELISA检测纯化后的抗体效价,说明其效价达到合格抗体标准。结论:试验制作的RERG抗体效价高、特异性好,可有效满足RERG蛋白的相关测定,填补了RERG的多克隆抗体的研究空白。 

【文章来源】：黑龙江医药科学. 2019,42(05)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

HIs－ＲEＲG蛋白纯化结果1．诱导前样品;2．诱导后的样品;3．超声后上清;4．超声后沉淀;M．marker

时，添加异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)对重组肌抑素表达进行诱导，同时做阴性对照:pEGX－T4－1和未加IPTG的BL21－pEGX－ＲEＲG。收集细胞，离心，SDS－PAGE检测。3．2融合蛋白ＲEＲG表达及纯化将各组份样品进行SDS－PAGE分析，10%SDS－PAGE150V70min电泳显示在预期大小位置出现明显诱生条带，与预期大小48ku一致，初步表明融合蛋白ＲEＲG得到了表达，表达形式为包涵体，见图2。采用镍琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化后，得到单一的目的条带，大小为48ku，见图3，与目的蛋白大小一致，表明目的蛋白成功得到纯化。图3融合蛋白ＲEＲG的表达M．蛋白Marker;1．XGBNWXＲHis－ＲEＲG蛋白质图4融合蛋白ＲEＲG的Western－blot鉴定M．蛋白Marker;1．融合蛋白ＲEＲG·2·黑龙江医药科学2019年10月第42卷第5期

离心，SDS－PAGE检测。3．2融合蛋白ＲEＲG表达及纯化将各组份样品进行SDS－PAGE分析，10%SDS－PAGE150V70min电泳显示在预期大小位置出现明显诱生条带，与预期大小48ku一致，初步表明融合蛋白ＲEＲG得到了表达，表达形式为包涵体，见图2。采用镍琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化后，得到单一的目的条带，大小为48ku，见图3，与目的蛋白大小一致，表明目的蛋白成功得到纯化。图3融合蛋白ＲEＲG的表达M．蛋白Marker;1．XGBNWXＲHis－ＲEＲG蛋白质图4融合蛋白ＲEＲG的Western－blot鉴定M．蛋白Marker;1．融合蛋白ＲEＲG·2·黑龙江医药科学2019年10月第42卷第5期

【参考文献】：
期刊论文
[1]沙门氏菌丝氨酸蛋白酶YihE的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 张志强,吴同垒,李永慧,王志仙,李蕴玉,张召兴,贾青辉,李佩国.  黑龙江畜牧兽医. 2017(19)
[2]GST-CBX2-1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达[J]. 刘婷隽,洪泽辉,胡安康.  黑龙江医药科学. 2017(03)



本文编号：3137133