应用细菌表面展示技术快速筛选抗原表位及研制应急疫苗
发布时间：2021-04-17 08:36
细菌表面展示技术作为噬菌体表面展示技术的有益补充，已被广泛用于生命科学各个领域。而构建基因工程减毒活疫苗是研究细菌展示系统的最初动因，也是这一系统最活跃的研究方向。但以往研究多是将已知抗原片段或表位展示于细菌表面用作实验性活菌苗。本研究提出了从细菌展示随机肽库筛选获得的抗原表位直接用作应急疫苗的新思路。 本研究首先以针对HBV pres的单克隆抗体为模型，生物淘洗商品化细菌鞭毛展示随机十二肽库，获得该抗体抗原模拟表位，核心序列为R-RG-Y，与HBV preS蛋白的135-140氨基酸同源；将展示模拟表位的菌体克隆直接免疫小鼠，可获得针对HBV preS蛋白的高滴度、高特异性抗体，表明从细菌展示随机肽库中筛选获得的抗原表位直接用于应急疫苗研制是可行的。 为克服常规生物淘洗在多抗表位筛选中的不足，以HBV preS单抗为靶分子利用FACS对模拟文库以及随机肽库FliTrxTM进行筛选，在此基础上建立消减FACS分选HBV preS免疫血清多克隆抗体抗原表位的方法，为今后从病人血清样品中进行抗原表位的筛选奠定了基础。 为更好地获得不同形式抗体的抗原表...
【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市
【文章页数】：82 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
FliTrxHBV-pres(+)不一r一iTrxHBv-pres卜)的PCR鉴定Fig2.2IdentifieationofFliTrxHBv-pres(+)andFliTrxHBV-pres(一)bypeR..一
与利用羊抗鼠FITC标记二抗系统所得结果基本一致，表明:抗体的生物素化效果较好，同时也表明Fli肠xHBV-p‘es(+)和Fli玩HBV-pros卜)在结合筛选抗体3B9方面确有差异，这都
有部分未完全酶切的pFvHp载体，将完全酶切后载体采用低熔点胶回收，并进行去磷酸化处理，再进行琼脂糖凝胶电泳，回收获得片段与酶切后样品的电泳行为完全一致(图3.3)。23222027图3.3载体酶切与回收产物琼脂糖电泳图谱Fig3.3SePerationofPFvHpandPurifiedlinearPFvHpon1.00/0agroseM:人oNA/HindllloNAmarke:A:pFvHp质粒B:sfil酶切后PFvHp质粒C:低熔点胶回收的线性化pFvHp3.3.2随机寡核昔酸插入片段的制备随机寡核营酸双链插入片段由两条寡核普酸片段经退火、延伸补平以及酶切过程而获得的。所设计的两条寡核普酸退火延伸补平获得片段大小约为84bp的片段，经sfil酶切去除两端的保护碱基，获得片段的大小约为63bp，经18%聚丙烯酞胺凝胶电泳分离，二者电泳行为有显著差异，分子量大小均与预期相符(图3.4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]人乙型肝炎病毒前表面抗原preS基因的克隆与序列分析[J]. 王淼,杜广希,金勇丰,张耀洲. 中国病毒学. 2001(03)
[2]HBsAg分子生物学与HBV疫苗研究进展[J]. 陈尔佳,林凌,周冬霞. 微生物学免疫学进展. 1999(02)
[3]应用细菌鞭毛递呈的随机肽库研究丙型肝炎病毒核心蛋白B细胞抗原表位[J]. 杜勇,周建军,王海涛. 病毒学报. 1998(04)
[4]乙型肝炎病毒DNA的结构研究[J]. 琦祖和,阎珺,祝庆麟. 中国科学（B辑 化学 生命科学 地学）. 1989(01)
[5]克隆的adr亚型乙型肝炎病毒（pADR-1）DNA的全顺序[J]. 甘人宝,储美瑾,沈绿萍,钱苏雯,李载平. 中国科学（B辑 化学 生物学 农学 医学 地学）. 1986(01)
本文编号：3143146
【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市
【文章页数】：82 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
FliTrxHBV-pres(+)不一r一iTrxHBv-pres卜)的PCR鉴定Fig2.2IdentifieationofFliTrxHBv-pres(+)andFliTrxHBV-pres(一)bypeR..一
与利用羊抗鼠FITC标记二抗系统所得结果基本一致，表明:抗体的生物素化效果较好，同时也表明Fli肠xHBV-p‘es(+)和Fli玩HBV-pros卜)在结合筛选抗体3B9方面确有差异，这都
有部分未完全酶切的pFvHp载体，将完全酶切后载体采用低熔点胶回收，并进行去磷酸化处理，再进行琼脂糖凝胶电泳，回收获得片段与酶切后样品的电泳行为完全一致(图3.3)。23222027图3.3载体酶切与回收产物琼脂糖电泳图谱Fig3.3SePerationofPFvHpandPurifiedlinearPFvHpon1.00/0agroseM:人oNA/HindllloNAmarke:A:pFvHp质粒B:sfil酶切后PFvHp质粒C:低熔点胶回收的线性化pFvHp3.3.2随机寡核昔酸插入片段的制备随机寡核营酸双链插入片段由两条寡核普酸片段经退火、延伸补平以及酶切过程而获得的。所设计的两条寡核普酸退火延伸补平获得片段大小约为84bp的片段，经sfil酶切去除两端的保护碱基，获得片段的大小约为63bp，经18%聚丙烯酞胺凝胶电泳分离，二者电泳行为有显著差异，分子量大小均与预期相符(图3.4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]人乙型肝炎病毒前表面抗原preS基因的克隆与序列分析[J]. 王淼,杜广希,金勇丰,张耀洲. 中国病毒学. 2001(03)
[2]HBsAg分子生物学与HBV疫苗研究进展[J]. 陈尔佳,林凌,周冬霞. 微生物学免疫学进展. 1999(02)
[3]应用细菌鞭毛递呈的随机肽库研究丙型肝炎病毒核心蛋白B细胞抗原表位[J]. 杜勇,周建军,王海涛. 病毒学报. 1998(04)
[4]乙型肝炎病毒DNA的结构研究[J]. 琦祖和,阎珺,祝庆麟. 中国科学（B辑 化学 生命科学 地学）. 1989(01)
[5]克隆的adr亚型乙型肝炎病毒（pADR-1）DNA的全顺序[J]. 甘人宝,储美瑾,沈绿萍,钱苏雯,李载平. 中国科学（B辑 化学 生物学 农学 医学 地学）. 1986(01)
本文编号：3143146
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