瘦素对于人OA软骨细胞RhoA/LIMK1/Cofilin细胞骨架调控通路的作用

发布时间：2021-04-29 15:54

　　研究背景与目的：骨关节炎（OA）是一种骨科常见的退行性变疾病,病因目前尚不清楚。OA目前较为公认的危险因素之一是长期超负荷的外力作用,肥胖人群的OA发病率显著上升。瘦素（leptin）是一种由白色脂肪组织分泌的小分子量蛋白,肥胖人群中瘦素的血清含量往往升高。Dumond等人报道OA患者关节液中的瘦素含量明显高于正常人,这种现象提示瘦素可能在OA疾病的发生和发展过程中起到某种作用。RhoA蛋白是调控细胞骨架的重要分子之一,OA软骨细胞与正常软骨细胞相比,前者细胞骨架含量明显升高。这也是两者在细胞结构上的显著差异之一。冯觉非等报道,大剂量瘦素不但不能激活RhoA蛋白,反而会导致软骨细胞逐渐皱缩,最终在细胞膜表面出现类似凋亡小体的小泡。为验证瘦素是否可以在某些条件下激活细胞骨架调控蛋白RhoA,进而通过RhoA/LIMK1/Cofilin信号通路引起OA软骨细胞细胞骨架结构发生改变,本文使用较低浓度的瘦素（1Ong/ml）作用于体外培养的OA软骨细胞,并利用荧光共振能量转移（FRET）法与Western blot法检测RhoA/LIMK1/Cofilin信号通路中关键蛋白的活性,探讨低浓度瘦... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：67 页

【学位级别】：博士

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目录
缩略词表
中文摘要
Abstract
前言
实验一 人类OA软骨细胞的体外培养
    一、实验材料
    二、实验方法
    三、实验结果
    四、实验讨论
    五、实验结论
实验二 电转染质粒至体外培养的人传代OA软骨细胞
    一、实验材料
    二、实验方法
    三、实验结果
    四、实验讨论
    五、实验结论
实验三 用荧光共振能量转移(FRET)法研究瘦素对OA软骨细胞细胞骨架调控蛋白RhoA的作用
    一、实验背景及基本原理
    二、实验材料
    三、实验方法
    四、实验结果
    五、实验讨论
    六、实验结论
实验四 利用Western blot方法检测瘦素刺激后体外培养的人传代OA软骨细胞中LIMk1和Phospho-LIMK1
    一、实验材料
    二、实验方法
    三、实验结果
    四、实验讨论
    五、实验结论
实验五 利用Western blot方法检测瘦素刺激后体外培养的人传代OA软骨细胞中Cofilin和Phospho-Cofilin
    一、实验材料
    二、实验方法
    三、实验结果
    四、实验讨论
    五、实验结论
实验六 细胞骨架肌动蛋白(F-actin)的免疫荧光染色
    一、实验材料
    二、实验方法
    三、实验结果
    四、实验讨论
    五、实验结论
实验结论
问题与展望
References
文献综述 RhoA/ROCK激酶信号通路与细胞骨架蛋白F-actin
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个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]单层培养的人关节软骨细胞生物学行为研究[J]. 周新社,戴尅戎,汤亭亭,胡诞宁.  解剖与临床. 2006(01)
[2]人负重关节软骨细胞的体外分离与培养[J]. 周新社,戴尅戎,汤亭亭,胡诞宁.  临床骨科杂志. 2004(02)
[3]FRET技术及其在蛋白质-蛋白质分子相互作用研究中的应用[J]. 王进军,陈小川,邢达.  生物化学与生物物理进展. 2003(06)
[4]大鼠烧伤血清对人脐静脉内皮细胞骨架的作用[J]. 宋力,陈波,黄巧冰,赵克森.  中国微循环. 2002(05)



本文编号：3167751