肺炎支原体LAMPs激活Nrf2及其对HO-1和NQO1表达的影响

发布时间：2017-04-19 18:21

  本文关键词：肺炎支原体LAMPs激活Nrf2及其对HO-1和NQO1表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，Mp）感染所引起的一系列炎症反应很大程度上是其细胞膜上的脂质相关膜蛋白（lipid-associated membraneproteins, LAMPs）所致。本研究旨在探讨MP LAMPs能否激活人单核细胞系THP-1中的核因子NF-E2相关因子2（Nuclear factor erythroid2-related factor2，NF-E2-related factor2，Nrf2），诱导血红素氧合酶-1（Hemeoxygenase，HO-1）和醌氧化还原酶（NADPH: quinine oxidoreductase，NQO1）的表达。 方法：培养Mp M129菌株至对数生长期，离心收集沉淀，抽提LAMPs，BCA法测定LAMPs浓度。体外培养THP-1细胞，CCK-8检测LAMPs的细胞毒性；Western blot检测LAMPs刺激THP-1细胞表达HO-1及NQO1的剂量依赖性及时间依赖性；比色法分析HO-1酶活性改变情况；Western blot及免疫荧光技术检测LAMPs刺激THP-1后Nrf2在细胞核及胞浆中的表达以了解Nrf2的核转位。实时定量逆转录PCR（qRT-PCR）检测LAMPs刺激Nrf2siRNA预处理的THP-1细胞HO-1和NQO1mRNA的表达水平。 结果： 1. LAMPs的浓度为1.029mg/mL. 2.用CCK-8检测LAMPs对THP-1细胞的毒性，结果发现PBS组和各浓度LAMPs作用组450nm波长光吸收值差异无显著性（P＞0.05）。 3. LAMPs可刺激THP-1细胞表达HO-1和NQO1，，且NQO1表达水平与LAMPs浓度呈剂量依赖性，HO-1的表达在LAMPs浓度为0~10μg/mL范围内先上升后递减，5.0μg/mL LAMPs刺激表达的HO-1最高。 4. HO-1和NQO1的蛋白表达随LAMPs刺激时间均呈先上升后下降的趋势，作用12h表达水平最高。 5.5.0μg/mL的LAMPs作用THP-1细胞12h后HO-1酶活性为（1.278±0.171）nmol/mg/h，较PBS组显著增高（P＜0.01），与LPS处理组差异无显著性（P＞0.05）。 6. LAMPs刺激THP-1细胞，胞浆内Nrf2表达水平逐渐减少，而细胞核内蛋白表达逐渐增高。 7. Nrf2siRNA可降低THP-1细胞Nrf2mRNA的表达。LAMPs刺激Nrf2siRNA预处理的THP-1细胞，HO-1的mRNA表达水平显著减少，NQO1mRNA表达水平无明显变化。 结论： 1. Mp LAMPs可诱导人THP-1细胞表达HO-1和NQO1。 2. Mp LAMPs刺激THP-1细胞表达HO-1受Nrf2调控，Nrf2调控NQO1表达的作用不明显。
【关键词】：肺炎支原体 脂质相关膜蛋白 血红素氧合酶-1 醌氧化还原酶-1 核因子相关因子-2
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R375.2
【目录】：

• 主要英文缩写4-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 1 前言11-13
• 2 实验材料13-16
• 3 实验方法16-25
• 4 实验结果25-32
• 5 讨论32-34
• 6 结论34-35
• 参考文献35-40
• 综述40-46
• 参考文献44-46
• 读硕期间论文46-47
• 致谢47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 李慧;陈丽;;血红素加氧酶-1与糖尿病心肌病变[J];国际内科学杂志;2007年06期

2 马小华;游晓星;吴移谋;;HO-1在免疫调节中的作用及其相关信号转导通路研究进展[J];中南医学科学杂志;2011年06期

3 刘少华;马可;许兵;徐鑫荣;;一氧化碳吸入对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的保护作用(英文)[J];生理学报;2006年05期

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本文编号：316878