小鼠胃癌模型中T淋巴细胞与NK细胞的改变

发布时间：2017-04-19 19:02

  本文关键词：小鼠胃癌模型中T淋巴细胞与NK细胞的改变，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 本研究通过建立胃癌小鼠模型，检测小鼠脾脏中T淋巴细胞、CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）、自然杀伤（NK）细胞活化受体NKG2D的表达水平和NK细胞的杀伤活性，探讨T淋巴细胞、调节性T细胞和NK细胞活化受体NKG2D在胃癌发展过程中的变化以及在肿瘤免疫逃逸机制中的作用。 方法： 1.通过615小鼠颈背部皮下种植不同浓度的小鼠前胃癌（MFC）细胞株建立胃癌小鼠模型，建模后经病理学检验。 2.建模成功后，小鼠分为胃癌组（n=20）和正常组(n=20)，取小鼠脾细胞，制成悬液，采用流式细胞仪检测小鼠脾脏T淋巴细胞及CD4+CD25+Treg的含量；并用RT-PCR法检测Treg细胞特异性标志物Foxp3mRNA基因的相对表达量； 3.同法，取小鼠脾细胞悬液，，用流式细胞仪检测NK细胞活化受体NKG2D的表达水平；脾淋巴细胞作为效应细胞，Yac-1作为靶细胞（小鼠NK细胞的靶细胞，其细胞表面无MHC-I类分子表达），用LDH酶法检测共培养后NK细胞的免疫活性。 结果： 1.所有小鼠皮下种植MFC细胞株均可成瘤。 2.胃癌组小鼠脾CD3+T、CD8+T较正常组升高有统计学意义（P0.05）；CD4+T/CD8+T细胞比值较正常组降低有统计学意义（P0.05）。 3.胃癌组小鼠脾Treg细胞及其特异性蛋白Foxp3的表达量较正常组升高，有统计学意义（P0.05）。 4.胃癌组小鼠脾NK细胞表面活性受体NKG2D的表达水平及NK细胞杀伤活性较正常组降低，有统计学意义（P0.05）。 结论： 1.615小鼠皮下种植小鼠前胃癌细胞能成功建立胃癌小鼠模型。 2.在胃癌发展过程中，胃癌细胞所引起的细胞免疫造成T细胞总数和CD8+T细胞水平升高，CD4+T细胞的比例会降低，从而引起CD4+T/CD8+T细胞比值降低。 3.在胃癌发展过程中，Treg细胞水平及其特异性蛋白Foxp3的表达量升高，推测在抗肿瘤免疫中，Treg细胞通过某些途径抑制机体的免疫反应。 4.在胃癌发展过程中，NK细胞表面活性受体NKG2D表达减少，NK细胞活性降低，推测肿瘤细胞可能通过某些途径逃避机体免疫杀伤作用。
【关键词】：胃癌 T细胞亚群 Treg细胞 Foxp3 NK细胞
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R735.2;R-332
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 缩略语表9-10
• 前言10-13
• 第一部分：胃癌小鼠模型的建立13-19
• 1.材料13-14
• 1.1 小鼠前胃癌细胞（MFC）株13
• 1.2 实验动物13
• 1.3 实验试剂13
• 1.4 主要仪器13-14
• 2.方法14-16
• 2.1 胃癌小鼠模型的建立14
• 2.2 实验方法14
• 2.3 MFC 细胞和胃癌小鼠肿瘤病理学检查14-16
• 3.结果16-18
• 3.1 小鼠成瘤情况及 HE 染色16-18
• 4.讨论18-19
• 第二部分：胃癌小鼠模型中脾脏 T 淋巴细胞的变化19-28
• 1.材料19-20
• 1.1 胃癌细胞株和实验动物19
• 1.2 实验试剂19
• 1.3 主要仪器19-20
• 2.方法20-23
• 2.1 实验方法20
• 2.2 小鼠脾细胞悬液制备20
• 2.3 流式细胞仪检测 T 细胞亚群及 Treg 细胞的变化20-21
• 2.4 RT-PCR 检测脾细胞 Foxp3 m RNA 的相对表达量21-22
• 2.5 PCR 反应22-23
• 2.6 统计学分析23
• 3.结果23-25
• 3.1 小鼠脾细胞 T 淋巴细胞亚群变化23-24
• 3.2 小鼠脾细胞 Treg 细胞的变化24-25
• 4.讨论25-28
• 4.1 小鼠脾细胞 T 淋巴细胞亚群的变化25-26
• 4.2 小鼠脾细胞 Treg 细胞及 Foxp3 mRNA 的变化26-28
• 第三部分：胃癌小鼠模型中 NK 细胞的变化28-32
• 1.材料28
• 2.方法28-30
• 2.1 实验方法28
• 2.2 用流式细胞仪检测 NK 细胞表面受体 NKG2D 的变化28
• 2.3 用 LDH 酶法检测胃癌细胞对小鼠 NK 细胞的活性的影响28-29
• 2.4 统计学分析29-30
• 3.结果30
• 3.1 胃癌组和正常组小鼠脾脏中 NK 细胞活性的变化30
• 3.2 胃癌组和正常组小鼠脾脏中 NK 细胞表面 NKG2D 的变化30
• 4.讨论30-32
• 结论32-33
• 参考文献33-36
• 文献综述36-44
• 参考文献41-44
• 致谢44-45
• 作者简介45-46
• 导师评阅表46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 刘平,赵志泉,张小勇,潘世扬,杨国平,丁小健;人胃癌细胞悬液裸小鼠原位移植模型建立及其部分生物学特性[J];南京医科大学学报;2000年06期

2 梁艳;邓安梅;仲人前;;NK细胞识别和杀伤机制研究进展[J];中国免疫学杂志;2007年03期

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本文编号：316901