HIMF在低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的作用

发布时间：2017-04-19 21:01

  本文关键词：HIMF在低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：【目的】 研究低氧促有丝分裂原因子（HIMF）调节大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖影响，并探讨Ca2+/PKC/MAPKs和PI3K/Akt/mTOR信号通路在此过程中的作用。 【方法】⑴将原代培养的大鼠PSAMCs随机分为对照组和低氧组H3h,H6h,H12h,H24h,H48h后，用荧光实时定量PCR和Western blotting分别检测每组的HIMFmRNA和蛋白表达变化；⑵构建过表达HIMF病毒，并用EDU法观察其对各组PASMCs增殖的影响；⑶过表达HIMF基因，将PSAMCs随机分为正常对照组（A组），空质粒转染组（B组）和过表达HIMF组（C组）。每组都依次单独加入EGTA（细胞外Ca2+螯合剂）、BAPTA-AM（细胞内Ca2+螯合剂）、A23187（Ca2+载体激动剂）、LY294002（PI3K抑制剂），Akt抑制剂检测各组PASMCs的P-PI3k，P-AktThr308，P-AktSer473，P-mTOR蛋白水平的变化;⑷过表达HIMF基因，分组同上，每组都依次单独加入EGTA（细胞外Ca2+螯合剂）、BAPTA-AM（细胞内Ca2+螯合剂）、A23187（Ca2+载体激动剂）、staurosporine（PKC抑制剂），检测各组PASMCs的p-PKC，p-p44/42（Thr202/Tyr204），p-p38（Thr180/Tyr182）蛋白水平的变化。 【结果】 ⑴HIMF mRNA和蛋白在常氧组均少量表达，在低氧条件下，它们表达均明显增加，与对照组比较均有显著差异(P0.05)，H6h组时它们表达均达最高水平； ⑵Edu细胞增殖实验结果显示：过表达HIMF组，PASMCs的增殖明显增加，，与正常对照组和空白对照组均有显著差异(P0.05)； ⑶与正常对照组和空白对照组相比较，过表达HIMF组，p-PI3k,p-AktThr308,p-AktSer473, p-mTOR, p-PKC, p-p44/42, p-p38蛋白表达水平均增加，差异有统计学意义(P0.05)。 【结论】 ⑴低氧能促进大鼠PASMCs的HIMF表达上调，并将其分泌到胞外的上清液中； ⑵HIMF在调节大鼠PASMCs增殖的过程中起重要的作用； ⑶Ca2+/PKC/MAPKs和PI3K/Akt/mTOR信号通路均在此过程中发挥重要的作用。
【关键词】：低氧促有丝分裂原因子 信号通路 大鼠肺动脉平滑肌细胞 增殖
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R363
【目录】：

• 主要缩略语4-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-27
• 实验结果27-36
• 讨论36-40
• 结论40-41
• 参考文献41-44
• 附图44-51
• 综述51-63
• 参考文献59-63
• 硕士期间科研成果63-64
• 致谢64-65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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本文编号：317104