OGT供体底物识别机制及其自身O-GlcNAc糖基化修饰功能的研究

发布时间：2021-05-06 04:13

　　O-GlcNAc糖基化修饰是一种动态的蛋白质翻译后修饰,广泛存在于植物和动物中,能够影响蛋白的催化活性、亚细胞定位以及与其他蛋白之间的相互作用,参与细胞内的信号转导、能量代谢等重要的细胞生理活动,与多种慢性疾病相关。O-GlcNAc糖基转移酶（OGT）负责催化O-GlcNAc糖基转移反应的发生。在人体内,OGT有三种亚型,即ncOGT、mOGT和sOGT,其结构的主要差异在于N末端TPR序列数目不同。由于三种亚型C末端催化结构域是完全相同的,因此其催化机制以及其与糖基供体的识别机制也应是相同的。因此在本课题中,我们选取了较为容易表达的sOGT作为研究对象,首先对其底物特异性进行了研究。以CKII十七肽为受体底物,我们探索sOGT对26种UDP-GlcNAc衍生物的催化活性。其中,UDP-6-deoxy-GlcNA、UDP-GlcNPr、UDP-6-deoxy-GalNAc和UDP-4-deoxy-GlcNAc四种化合物能够作为sOGT的供体底物。进一步对其中三种化合物的酶学常数的测定表明,UDP-GlcNAc糖基基团的C2位乙酰氨基上的取代、C6和C4位羟基的脱氧取代以及C4位羟基的异... 

【文章来源】：南开大学天津市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：156 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    第一节 糖的生物学意义
        1.1.1 生物体内的糖和糖类复合物
        1.1.2 糖基化修饰相关酶类
        1.1.3 UDP-GlcNAc与HBP途径
    第二节 O-GlcNAc糖基化
        1.2.1 O-GlcNAc糖基化的发现
        1.2.2 O-GlcNAc糖基化的特点
        1.2.3 O-GlcNAc糖基化对蛋白功能的影响
        1.2.4 O-GlcNAc糖基化对细胞生理活动的影响
        1.2.5 O-GlcNAc糖基化与疾病
    第三节 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(OGT)
        1.3.1 OGT的生物学意义
        1.3.2 OGT的亚型与分布
        1.3.3 OGT的结构与反应机制
        1.3.4 OGT的自身糖基化
第二章 材料与方法
    第一节 实验材料
        2.1.1 实验用菌株、基因及细胞来源
        2.1.2 糖供体和糖受体来源
        2.1.3 主要实验试剂及耗材
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 主要试剂的配制
    第二节 实验方法
        2.2.1 sOGT外源表达及功能验证
        2.2.2 sOGT供体底物的筛选及酶活常数测定
        2.2.3 OGT自身糖基化现象在细胞水平和组织水平的验证
        2.2.4 sOGT细胞内功能验证
        2.2.5 sOGT自身糖基化及其功能的验证
第三章 OGT供体底物识别机制
    第一节 结果及分析
        3.1.1 pET28a-sOGT重组质粒的验证
        3.1.2 sOGT供体底物的筛选及酶活常数测定
    第二节 讨论
    第三节 小结
第四章 OGT自身O-GlcNAc糖基化修饰的功能
    第一节 结果与分析
        4.1.1 OGT自身糖基化现象在细胞水平和组织水平的验证
        4.1.2 sOGT细胞内功能验证
        4.1.3 sOGT自身糖基化位点的验证
        4.1.4 sOGT自身糖基化的功能
    第二节 讨论
        4.2.1 OGT自身糖基化现象的验证
        4.2.2 sOGT自身糖基化位点的鉴定
        4.2.3 OGT自身糖基化的功能
    第三节 小结
参考文献
致谢
附录
    附录A 非糖基化sOGT结合的互作蛋白
    附录B 糖基化sOGT结合的互作蛋白
个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果
    个人简历
    研究成果



本文编号：3171215