NGF促进雪旺细胞增殖及其NF-KB表达上调的研究

发布时间：2017-04-21 06:32

  本文关键词：NGF促进雪旺细胞增殖及其NF-KB表达上调的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：目前，相关研究发现NGF对雪旺细胞的增殖具有促进作用。同时，在雪旺细胞增殖的过程中发现有NF-KB的表达。现已明确NF-KB的表达对细胞具有抗凋亡、促增殖的效果。本实验据此就NGF促进SCs的增殖及其与NF-KB的表达上调是否存在某种关系进行了研究.旨在为进一步明确雪旺细胞增殖的机制提供相关数据。 方法：选择健康家兔十只，给予5%戊巴比妥钠(50mg/kg)麻醉，无菌条件下取出坐骨神经，分离培养出雪旺细胞，并进行S-100免疫细胞化学鉴定，以鉴定细胞纯度，将细胞密度调整至1×105/ml后，接种到预涂有鼠尾胶的三个培养皿，分别计为实验组（加入40ng/ml的NGF）；阻断组（加入40ng/ml的NGF和anti-NGFR）；对照组（加入等量PBS）。置于37℃含5%CO2的培养箱中培养5天，荧光显微镜下观察S-100荧光标记阳性细胞并计数，提取RNA及蛋白进行相关检测，每组应进行三次重复实验。然后进行统计学分析。 结果：接种后的第24h开始，可以倒置显微镜下观察到贴壁生长的具有明显形态的雪旺细胞，镜下观察所有分组的细胞都包含两类，雪旺细胞胞核为长形或圆形；胞体为立体感强、非常饱满的梭形体，两端有细长的突起，胞体周围长有亮带，即生长晕，细胞数量占绝大多数。另一种细胞即成纤维细胞，胞核很浅，具2~3个核仁，胞体扁平、大且不规则，常常出现多而短的突起，数量较少。所有分组的雪旺细胞均呈“端端相对，极极相对”等旋涡排列或网状排列，逐渐形成片状，有如“地毯”。 S-100免疫组化检测鉴定，对胞浆为棕褐色的阳性细胞进行计数，结果为：本研究体外培养的雪旺细胞纯度达到了91％。OD值结果显示：实验组中，，雪旺细胞24~72h增殖速率明显加强，72h后增殖依然强劲，至第5d达到峰值，最后渐渐缓慢下降；期间与对照组在每一时间节点均出现显著差异。自CLSM上进行图像采集显示：阻断组和实验组雪旺细胞的NF-KB绿色荧光同样多出现于胞浆区；实验组强度较正常组显著提高，而阻断组与对照组无明显差别。经LeiCaConfoeal图像分析软件分析，结果显示：阻断组与实验组均出现显著差异（p＜0.01），而对照组与阻断组组无显著差异（p＞0.05）。对照组、阻断组、实验组雪旺细胞中NF-KB mRNA进行实时荧光定量PCR检测后，实验组较对照组、阻断组出现显著增高，而阻断组和对照组相比，无显著差异。 结论：1.采用组织贴块法、差速贴壁法与低浓度胰蛋白酶消化法、G-418相结合的纯化形式，可以建立良好的家兔坐骨神经SCs原代培养模型。 2.添加40ng/L的外源性NGF可以显著提高SCs的增殖速率，同时NF-KB表达明显上调。添加NGF+anti-NGFR组的SCs细胞增殖速率和NF-KB的表达水平都与对照组无明显区别.由此可以说明NGF是通过与P75结合来促进雪旺细胞增殖和提高NF-KB表达水平的。 3.NF-KB表达在SCs增殖过程中表达上调，且增殖最快的实验组中表达上调的最高，且大量实验研究表明NF-KB的表达可以抑制细胞的凋亡，促进细胞的增殖。所以推测NF-KB的高表达对雪旺细胞的增殖具有一定的作用，但若要证实其与SCs增殖具有直接的关联性还需后续实验继续探讨。
【关键词】：雪旺细胞 NGF NF-KB
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英汉缩略词对照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料与方法13-22
• 1.1 实验动物取材13
• 1.2 设备及器械13-14
• 1.3 药物及试剂14-15
• 1.4 溶液配制15-16
• 1.5 实验方法16-18
• 1.6 MTT 比色鉴定18-21
• 1.7 统计学分析21-22
• 2 结果22-28
• 2.1 体外培养的雪旺细胞形态特点22-23
• 2.2 体外培养的雪旺细胞形态特点23-24
• 2.3 MTT 比色实验24-25
• 2.4 不同实验组别雪旺细胞内 NF-KB 的表达水平比较25-26
• 2.5 不同实验组别雪旺细胞内NF-KB-mRNA的表达26-28
• 3 讨论28-32
• 3.1 雪旺细胞体外培养28-29
• 3.2 P75 与 NGF、NF-kB 的关联性29-30
• 3.3 NGF、P75 与 NF-KB 的表达30-32
• 4 结论32-33
• 参考文献33-38
• 综述38-54
• 参考文献48-54
• 攻读学位期间发表的学术论文目录54-55
• 致谢55-56
• 附件56

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  本文关键词：NGF促进雪旺细胞增殖及其NF-KB表达上调的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：319674