Hippo通路主要组分与小鼠原始卵泡池大小的时序相关性研究

发布时间：2017-04-21 06:38

  本文关键词：Hippo通路主要组分与小鼠原始卵泡池大小的时序相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景及目的: 阐明原始卵泡启动的分子机制对于防治女性不孕症和卵巢早衰具有重要意义。最近研究表明，卵巢皮层密度变化能触发原始卵泡的启动，而在果蝇中的研究显示由多个癌基因（Mst/Lats/Yap）参与的Hippo信号通路可感知卵巢细胞密度的变化。本课题探究Hippo通路主要组份MST、LATS、YAP与小鼠原始卵泡池大小的时序相关性以及原始卵泡启动前后的表达变化，为进一步了解卵巢的功能及其调控机理增添新资料。 方法: 1.利用Western blot、Real-time PCR及免疫组化等方法检测出生后3d、1m、5m及16m等不同月龄小鼠卵巢中mst、lats和yap mRNA及蛋白的表达变化及定位，分析Hippo信号通路主要组分与原始卵泡池大小的时序相关性。 2.建立小鼠原始卵泡体外培养模型，利用Western blot、Real-time PCR及免疫组化等方法检测mst、lats和yap mRNA及蛋白在原始卵泡启动前后表达变化。 3.利用Western blot检测原始卵泡启动前后及卵泡发育过程中P-YAP蛋白表达变化，分析P-YAP/YAP比值变化情况。 结果： 1．Western blot结果显示：MST蛋白以3d组含量最高，此后随着月龄的增长，MST含量显著减少（p0.05），但1m、5m、16m三组之间表达并无显著性差异（p0.05）；LATS蛋白表达亦呈现与MST的变化趋势（p0.05，p0.01，p0.05），但16m与5m相比较却显著增多（p0.05）；YAP蛋白表达以3d组最低，此后1m、5m、16m组显著升高（p0.05，p0.01，p0.01），而16m与5m组比较显著减少（p0.05）。P-YAP蛋白表达与3d组相比，1m、5m、16m均显著增多（p 0.05），但1m、5m、16m三组之间表达无显著性差异（p0.05）；随着月龄增加，P-YAP/YAP比值均显著减少（p 0.05），但16m与5m组比较无显著性差异（p0.05）。 2. Real-time PCR结果显示：随着小鼠月龄的增长，mst、lats mRNA表达均表现为3d最多，此后逐渐减少（p0.05，p0.01，p0.01），然而16m组表达显著高于5m组（p0.05）；yap mRNA表达3d最少，此后极为显著增多，（p0.01，p0.001，p0.01），但16m组表达显著低于5m组（p0.05）。 3.免疫组化结果显示：MST、LATS、YAP在原始卵泡中均主要分布于卵母细胞质中，在初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡的卵母细胞质、卵周膜及颗粒细胞中均有表达，且在次级卵泡中强表达于颗粒细胞，在闭锁卵泡中则少表达或无表达。此外，P-YAP亦表达于卵巢卵泡中，在原始卵泡的卵母细胞质中有表达，在初级卵泡、次级卵泡及成熟卵泡中主要分布于卵母细胞质、卵周膜和颗粒细胞，在闭锁卵泡中主要分布于颗粒细胞中。 4.3日龄小鼠卵巢体外培养8天后，HE染色结果显示原始卵泡大量启动发育为初级卵泡，Western blot及免疫组化结果均显示PCNA蛋白表达显著增加（p 0.05），提示小鼠原始卵泡Waymouth体外培养体系成功建立。 5.利用Western blot及Real-time PCR检测原始卵泡启动前后MST、LATS、YAP表达量变化，结果显示：mst mRNA及蛋白表达均显著减少（p 0.05）；latsmRNA及蛋白表达均显著减少（p 0.05）；yap mRNA及蛋白表达均显著增多（p0.05，p 0.01）；P-YAP蛋白表达显著增多（p 0.05），P-YAP/YAP比值显著减少（p 0.05）。 结论： 1. Hippo通路主要组份MST、LATS、YAP在小鼠卵巢内均有表达，且与原始卵泡池大小存在着时序相关性。 2.在小鼠卵巢原始卵泡启动前后，，Hippo通路主要组份的表达及定位发生了改变。。 3.原始卵泡启动可能与P-YAP/YAP比值显著下降有关。
【关键词】：hippo 原始卵泡池 卵泡发育 小鼠
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R321.1
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 引言11-15
• 第2章 材料与方法15-24
• 2.1 材料15-17
• 2.1.1 实验动物15
• 2.1.2 主要试剂15-16
• 2.1.3 主要仪器16-17
• 2.2 方法17-24
• 2.2.1 原始卵泡的体外培养17-18
• 2.2.2 Western blot18-19
• 2.2.3 Real-time PCR19-21
• 2.2.4 免疫组织化学21-23
• 2.2.5 统计分析23-24
• 第3章 结果24-34
• 3.1 Hippo 通路主要组份在不同月龄小鼠卵巢中的表达及变化24-30
• 3.1.1 Western blot 检测 MST、LATS、YAP 蛋白表达量变化24-25
• 3.1.2 Real-time PCR 检测 mst、lats、yap mRNA 表达量变化25-26
• 3.1.3 免疫组化检测 MST、LATS、YAP 在卵巢组织中的分布26-29
• 3.1.4 Western blot 检测 P-YAP 蛋白表达，分析 P-YAP/YAP 比值29-30
• 3.2 建立小鼠原始卵泡体外培养体系，检测相关卵泡发育指标30-31
• 3.3 mst,lats,yapmRNA及蛋白在原始卵泡启动前后的表达量变化及P-YAP/YAP 比值分析31-34
• 第4章 讨论34-37
• 4.1 小鼠选用分组依据34
• 4.2 Hippo 信号通路在小鼠卵巢中的表达及动态变化34-35
• 4.3 Hippo通路在小鼠原始卵泡“启动”与“静息”维持中可能扮演的角色35-37
• 第5章 结论37-38
• 致谢38-39
• 攻读学位期间研究成果39-40
• 参考文献40-43
• 综述43-51
• 参考文献49-51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 肖红梅;钟群;卢光t;;不孕症相关因素及病因分析[J];国际病理科学与临床杂志;2007年02期

2 谢水玲;沈建箴;;Hippo通路在肿瘤发生中的研究进展[J];医学综述;2012年08期

  本文关键词：Hippo通路主要组分与小鼠原始卵泡池大小的时序相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：319706