登革病毒在宿主选择压力下基因组核苷酸变异与毒力的相关研究

发布时间：2017-04-23 15:09

  本文关键词：登革病毒在宿主选择压力下基因组核苷酸变异与毒力的相关研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：像其它虫媒病毒一样，登革病毒在自然环境下通常是维持在脊椎动物宿主和蚊介媒虫间循环传播。随着时间的推移，登革病毒的基因分型呈上升趋势。由于登革热在许多区域仍持续存在和流行，为了更好地对该病进行有效的防控，本研究针对登革病毒在自然界中不同宿主的选择压力下，可能会产生的变异，从而导致毒力以及与宿主相互作用关系的变化进行深入探索。 本研究一方面利用人肝癌细胞（Huh7）和蚊虫细胞（C6/36）模拟自然界中登革病毒（DEN-2）在宿主间交替传播循环以及连续传播；另一方面利用节肢动物（埃及伊蚊）与脊椎动物体（昆明乳鼠）模拟自然界中病毒在宿主间交替传播循环。采用空斑滴定法与实时荧光定量PCR法分析病毒间的病毒滴度及适应性变化；通过对乳鼠神经毒力及病毒在蚊虫体内的感染、传播和增殖能力分析病毒变异株的生物学特性和分子特征的研究。本研究的主要结果如下： 1. DEN-2病毒在不同细胞内传代的病毒毒力的改变及基因演化。 在实验条件下，，适应性的降低发生在交替传代的病毒，且病毒复制能力较亲代病毒弱；而连续传代病毒的适应性呈增加趋势，其病毒复制能力较强。此外，交替传代病毒对媒介蚊虫的感染、增殖能力及小鼠半数致死量（LD50）较亲代病毒低。结果初步说明了而交替传代的病毒株是减毒的。通过对细胞传代病毒变异株的ORF基因序列进行对比分析，表明E307、NS4B-20位氨基酸位点的变化可能导致了交替传代病毒株毒力的减弱；而E155、E186及E293氨基酸位点的变化可能导致连续传代病毒株毒力的增强。 2. DEN-2病毒媒介与宿主间交替循环传播的毒力改变及基因演化。 在实验条件下，登革病毒在埃及伊蚊与昆明乳鼠体内的传播循环中，第4个循环获得的变异毒株（P4-Alt mice病毒株）对媒介蚊虫的感染、传播、增殖能力及小鼠半数致死量（LD50）较亲代病毒有明显增强。结果初步说明了P4-Altmice病毒株是增毒的。通过对病毒的ORF基因序列进行对比分析，表明M蛋白、E71、E129、E390、E491、NS1-190和NS2A-34氨基酸位点的突变很可能是导致毒力增强的原因。 本研究结果更好地理解选择压力下登革病毒进化与带来疾病有关未来的问题。为推测登革病毒在自然界中的发生、发展趋势以及新毒株的出现提供了理论依据。
【关键词】：登革病毒 适应性 毒力 基因分析 毒力位点
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373.33
【目录】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-9
• 1 材料与方法9-19
• 1.1 材料9-11
• 1.2 方法11-19
• 2 结果19-43
• 2.1 DEN-2 病毒模拟自然界在 Huh7，C6/36 细胞内传代的病毒变异株的结果19-34
• 2.2 DEN-2 病毒模拟自然界在埃及伊蚊与昆明乳鼠体内交替循环传播的结果34-43
• 3. 讨论43-50
• 4 结论50-51
• 5 参考文献51-56
• 致谢56-57
• 附录 157-58
• 附录 258-59
• 附录 359-61
• 已接受文章61-72
• 已完成投稿文章72-90
• 个人简历90-91
• 综述91-95
• 参考文献95

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