大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞的研究

发布时间：2017-04-23 23:07

  本文关键词：大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景在缺血性心脏病的治疗中，心肌再生一直是国内外研究的焦点。骨髓间充干细胞（BMSCs）易于获取，在一定条件下，能在体外大量扩增，同时自体移植不存在伦理争议，也没有免疫排斥反应且在体内外不同诱导条件下可分化为内皮细胞、成骨细胞、心肌细胞等优势[1-4]，备受关注。研究发现，BMSCs在体内、体外诱导环境下，均可分化为心肌样细胞，但其机制尚不明确[5-7]。本实验将大鼠BMSCs分别用5-氮胞苷(5-Aza)诱导和与心肌细胞(CM)共培养的方法进行体外诱导，观察大鼠BMSCs诱导分化后的生长情况和形态变化，及其在不同时间段分化为心肌样细胞的能力及表达心肌样细胞特异性标记物cTnI、Cx43和心肌特异性转录因子GATA-4的差别，为今后进一步研究BMSCs分化机制以及应用于临床治疗缺血性心脏病提供一定的理论依据和技术手段。 目的研究体外不同诱导条件下大鼠BMSCs在不同时间段分化为心肌样细胞的能力及表达心肌样细胞特异性标记物的差别。 方法分离培养SD大鼠BMSCs和SD乳鼠CM并鉴定。取第3代BMSCs分别进行5-氮胞苷（5-Aza）诱导、与CM共培养及单独培养。分别于第2、4、6、8、10周使用倒置显微镜观察细胞生长情况和形态变化，RT-PCR检测每组心肌特异性基因cTnI、Cx43和心肌特异性转录因子GATA-4。 结果单独培养组未见有搏动细胞, cTnI、Cx43和GATA-4基因表达阴性；5-aza诱导组于第2周时细胞呈梭形且排列方向趋于一致，未见有搏动细胞，cTnI、Cx43基因表达第8周达到高峰，GATA-4基因表达第4周达高峰；共培养组细胞多为梭形，成肌性排列，可见搏动频率不一致的搏动细胞，cTnI、Cx43基因表达于第2-8周表达逐渐增加，GATA-4基因表达第6周达高峰；相同时段内,共培养组的GATA-4、cTnI、Cx43基因表达高于5-Aza诱导组(P0.05)。随着培养时间的延长三组细胞崩解死亡的细胞数开始增多，培养12周后尤其明显。 结论BMSCs经5-Aza诱导或与CM共培养,可转化为心肌样细胞并表达基因cTnI、Cx43和GATA-4，且共培养组BMSCs分化为心肌样细胞的能力比5-Aza诱导组强。心肌微环境可促进BMSCs定向分化为心肌样细胞。
【关键词】：大鼠骨髓间充质干细胞 乳鼠心肌细胞 5 氮胞苷 共培养 诱导分化
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中英文缩略词表5-6
• 摘要6-7
• 英文摘要7-9
• 1.前沿9-11
• 2.材料与方法11-20
• 2.1 材料11
• 2.1.1 实验动物11
• 2.1.2 试剂及仪器11
• 2.2 实验方法11-20
• 2.2.1 BMSCs 及 CM 的分离和培养11-12
• 2.2.2 BMSCs 和 CM 的鉴定12-17
• 2.2.2.1 BMSCs 的鉴定12
• 2.2.2.2 CM 的鉴定12-17
• 2.2.3 实验分组17-18
• 2.2.4 RNA 提取及 RT-PCR18-20
• 2.2.4.1 RNA提取18
• 2.2.4.2 RT-PCR 过程18
• 2.2.4.3 PCR过程18-20
• 2.2.5 统计分析20
• 3.结果20-22
• 3.1 BMSCs培养情况20
• 3.2 CM的培养情况20
• 3.3 各组细胞形态与生长变化情况况20-21
• 3.4 各组RT-PCR结果21-22
• 4.讨论22-23
• 5.结论23
• 6.参考文献23-27
• 附录27-28
• 致谢28-29
• 综述29-33
• 参考文献32-33

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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  本文关键词：大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞的研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：323152