血红素氧合酶1对AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响

发布时间：2017-04-24 00:04

  本文关键词：血红素氧合酶1对AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景及目的 心力衰竭(heart failure)简称心衰,是由心脏结构性或功能性疾病所导致的一种临床综合征,心肌损害引起心室充盈和(或)射血能力受损,最后导致心室泵血功能降低,即使在足够静脉回流条件下,心搏出量仍不能满足机体代谢的需要,是冠心病、高血压、先天性心脏病、心肌病和瓣膜病等许多心脏疾病的最终结局。随着医疗技术的发展,介入治疗的普及,冠心病及瓣膜病等心血管疾病患者存活期的延长,以及老龄化的加重,使得心哀患者的发病率逐渐增加。研究证实,心肌细胞凋亡增加导致心肌细胞数量减少,是心力衰竭发生发展的重要根源之一,而神经内分泌过度激活、血管紧张素Ⅱ(angiotensin II, AngⅡ)的分泌增加是导致心衰患者细胞凋亡、左室重构、心衰发展的重要机制。研究抑制AngⅡ引起的心肌细胞凋亡的靶点,对于探讨阻止心力衰竭的发生发展的新思路具有重要意义。血红素氧合酶1(heme oxygenase-1, HO-1)广泛存在于机体各组织细胞微粒体中,是催化血红素降解的关键酶,通过分解血红素生成一氧化碳(Carbon monoxide, CO)、胆绿素、亚铁离子等产物,发挥抗氧化、抗炎症、扩张血管、调控细胞增殖与凋亡等重要作用。对于心血管系统的保护具有重要意义,但对于心肌细胞凋亡HO-1的影响如何国内尚未见报道。 本实验通过AngⅡ诱导大鼠心肌细胞凋亡,HO-1诱导剂和抑制剂分别作用于AngⅡ诱导的心肌细胞,观察心肌细胞凋亡的变化,以探讨HO-1对AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的影响,为临床治疗心力衰竭探讨新的思路和预后判断提供理论基础。 方法 1.原代培养新生1-2d Wistar大鼠心肌细胞,免疫荧光鉴定。 2.将心肌细胞随机分为四组：①对照组(常规培养)；②Angll组：加入AngⅡ;③AngII+hemin组：加入AngⅡ和氯化血红素(hemin);④AngII+ZnppIX组：加入AngⅡ和锌原卟-9(ZnppIX)。 3.Trizol法提取各组心肌细胞总RNA,以GAPDH为内参照,通过实时定量PCR(Real Time-PCR)技术检测HO-1mRNA的相对表达水平。 4.提取各组心肌细胞总蛋白,BCA法测蛋白浓度,以GAPDH为内参照,Western blot检测HO-1蛋白的相对表达水平。 5.流式细胞仪和原位末端标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡率。 结果 (1)各组心肌细胞HO-1mRNA表达：对照组、Angll组、AngⅡ+hemin组和AngⅡ+ZnppIX组HO-1mRNA相对表达水平分别为：1.00+0.00,3.40±1.29,8.89±2.26,1.244-0.44。①与对照组比较：AngⅡ组、AngⅡ+hemin组和AngⅡ+ZnppIX组心肌细胞HO-1mRNA表达均升高,AngⅡ组、AngⅡ+hemin组有统计学差异(P0.05)；AngⅡ+ZnppIX组无统计学差异(P0.05)；②与AngII组比较：AngⅡ+hemin组明显升高,AngⅡ+ZnppIX组明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。 (2)各组心肌细胞HO-1蛋白相对表达：对照组、AngⅡ组、AngⅡ+hemin组和AngⅡ+ZnppIX组HO-1蛋白相对表达水平分别为：0.50±0.12,0.82+0.13,1.57±0.18,0.54±0.11。①与对照组比较：AngⅡ组、AngⅡ+hemin组和AngⅡ+ZnppIX组心肌细胞HO-1蛋白表达均升高,AngⅡ组、AngⅡ+hemin组差异有统计学意义(P0.05)；AngⅡ+ZnppIX组无统计学差异(P0.05)；②与AngⅡ组比较：AngⅡ+hemin组明显升高,AngⅡ+ZnppIX组明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。 (3)流式细胞仪技术测心肌凋亡率：对照组、AngⅡ组、AngⅡ+hemin组和AngⅡ+ZnppIX组心肌细胞凋亡率分别为：12.1%±1.8%,26.0%±2.9%,15.2%±2.1%,39.7%±2.3%。①与对照组比较心肌细胞凋亡率：AngⅡ组、AngⅡ+hemin组和AngⅡ+ZnppIX组均增加,AngII组和AngⅡ+ZnppIX组差异有统计学意义(P0.05)；AngⅡ+hemin组无统计学差异(P0.05)；②与AngⅡ组比较心肌细胞凋亡率：AngⅡ+hemin组明显下降,AngⅡ+ZnppIX组明显升高,差异均有统计学意义(P0.05)。 (4)原位末端标记技术(TUNEL)测凋亡指数：对照组、Angll组、AngⅡ+hemin组和AngⅡ+ZnppIX组心肌细胞凋亡率分别为：7.6%±2.5%,40.8%±8.2%,10.3%±2.7%,54.5%±6.3%。①与对照组比较心肌细胞凋亡指数：AngⅡ组、AngⅡ+hemin组和AngⅡ+ZnppIX组均增加,AngⅡ组和AngⅡ+ZnppIX组差异有统计学意义(P0.05)；AngⅡ+hemin组无统计学差异(P0.05)；②与AngⅡ组比较心肌细胞凋亡指数：AngⅡ+hemin组明显下降,AngⅡ+ZnppIX组明显升高,差异均有统计学意义(P0.05)。 结论 AngⅡ诱导心肌细胞凋亡,HO-1对AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡具有抑制作用。
【关键词】：血红素氧合酶-1 血管紧张素Ⅱ 心肌细胞 凋亡
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 符号说明12-13
• 前言13-15
• 材料与方法15-26
• 结果26-32
• 讨论32-36
• 结论36-37
• 参考文献37-42
• 综述42-49
• 参考文献47-49
• 攻读学位期间待发表的学术论文目录49-50
• 致谢50-51
• 附件51

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 赵浦;孙玲娣;张鸿彦;;血红素氧合酶-1在缺血再灌注大鼠肾脏的表达及意义[J];实用儿科临床杂志;2006年05期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 曹海军;陈淼;;HO-1对ARDS大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞保护作用的研究进展[A];贵州省医学会重症医学分会第三届学术年会论文汇编[C];2008年

中国硕士学位论文全文数据库 前9条

1 任彩玲;运动对SHR心肌和血管平滑肌HO-1mRNA表达和HO活性影响及作用机制的研究[D];扬州大学;2006年

2 曹春蕾;培哚普利与阿托伐他汀对高胆固醇兔脑组织AngⅡ的影响及其抗氧化应激作用[D];山西医科大学;2008年

3 张焕荣;HO-1在UUO大鼠肾间质纤维化保护作用的研究[D];河北医科大学;2008年

4 刘桠;参芪复方对GK大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究[D];成都中医药大学;2007年

5 谷玮玮;HO-1/CO在褪黑素减轻内毒素休克致大鼠急性肺损伤中的作用[D];河北医科大学;2009年

6 曹海军;血红素加氧酶-1对急性肺损伤大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞抗氧化损伤的研究[D];遵义医学院;2009年

7 吴志莲;AT受体在血管紧张素Ⅱ引起的内皮祖细胞凋亡中的作用[D];山西医科大学;2010年

8 杜瑞;FoxO4在血管紧张素Ⅱ诱导的内皮祖细胞凋亡中的机制研究[D];山西医科大学;2010年

9 卢新U

本文编号：323226