江苏省不同地区淡色库蚊的遗传多样性分析

发布时间：2017-04-24 04:07

  本文关键词：江苏省不同地区淡色库蚊的遗传多样性分析，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]应用扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)技术对江苏省不同地区淡色库蚊的遗传多样性及遗传变异进行分析,计算样品间的遗传相似性指数和遗传距离,并构建UPGMA(非加权分组平均法)系统发生树。 [方法]从江苏省收集了8个地区的淡色库蚊,分别来自常熟、张家港、盐城、无锡、徐州、南京、南通、昆山,还收集了南京医科大学病原生物学实验室饲养的典型淡色库蚊；用QIAGEN DNeasy Kit试剂盒分别提取蚊基因组DNA,通过COI基因扩增、多重PCR扩增ITS基因和ITS的克隆测序进行模板的验证,然后进行AFLP的分析,即通过酶切与连接、预扩增、选择性扩增,再经毛细管电泳筛选出分辨率高的电泳图；将电泳图上出现的条带标记为1,没有条带的标记为0,建立0,1矩阵,将结果输入NTSYS2.10软件上计算Nei-Li相似性系数,遗传距离(GD)用公式计算：GD=1-2Nab/(Na+Nb),采用UPGMA(unweighted pair-group method with arithmetic means,非加权分组平均法)进行聚类分析。 [结果]从80对引物组合中筛选出10对引物组合,这10对引物组合在9个样本中共扩增到262个位点,大小位于100-1500bp,多态性位点185个,多态性比率(PP)达70.6%,每对引物扩增到的多态性位点在14-30个之间,平均18.5个。引物组合E2M7扩增的多态性最高,多态性比例为87.5%,引物组合E4M7扩增的多态性最低,多态性比例为48.3%,10对引物中昆山地区扩增的位点最多(176个),南通地区扩增的位点最少(48个)；利用NTSYS2.10软件计算表明,昆山与张家港间的遗传相似性指数最大(0.8478),遗传距离最小(0.1522),无锡和徐州间的遗传相似性指数最小(0.2139),遗传距离最大(0.7861)。基于Nei遗传距离构建的UPGMA系统发生树表明,以相似性系数0.64为域值,9个地区的淡色库蚊聚成三支,其中南医大、盐城、徐州聚成一支；常熟、张家港、昆山聚成一支；无锡、南通、南京聚成一支。 [结论]江苏省不同地区的淡色库蚊存在显著的遗传多样性和遗传差异,且表明AFLP技术具有极好的分辨率,可以有效地进行淡色库蚊遗传多样性的分析。
【关键词】：淡色库蚊 AFLP 遗传多态性 分子鉴定 遗传相似性 聚类分析
【学位授予单位】：安徽理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R384.1
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-12
• 注释说明清单12-13
• 引言13-18
• 1 材料与方法18-33
• 1.1 实验材料18-20
• 1.1.1 实验蚊18
• 1.1.2 主要试剂18
• 1.1.3 主要溶液及缓冲液的配制18-19
• 1.1.4 主要仪器19-20
• 1.2 实验方法20-32
• 1.2.1 淡色库蚊的分子鉴定20-25
• 1.2.2 淡色库蚊的遗传多样性分析25-32
• 1.3 数据统计分析32-33
• 2 结果与分析33-42
• 2.1 mtDNA-COI基因的扩增与测序结果33-35
• 2.1.1 淡色库蚊基因组DNA的提取33-34
• 2.1.2 mtDNA-COI基因PCR产物34
• 2.1.3 mtDNA-COI基因PCR扩增产物测序结果34-35
• 2.2 rDNA-ITS基因多重PCR产物琼脂糖凝胶电泳35
• 2.3 rDNA-ITS克隆测序结果35-36
• 2.4 PCR预扩增产物的琼脂糖凝胶电泳36-37
• 2.5 PCR选择性扩增产物的琼脂糖凝胶电泳37-38
• 2.6 PCR选择性扩增产物的毛细管电泳38-39
• 2.7 样本AFLP扩增结果及遗传多样性39-42
• 2.7.1 AFLP扩增结果39-40
• 2.7.2 各个地区淡色库蚊的遗传多样性40
• 2.7.3 各个地区淡色库蚊的UPGMA分析40-42
• 3 讨论42-45
• 结论45-46
• 参考文献46-54
• 后记或致谢54-55
• 作者简介及读研期间主要科研成果55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈永久,王学忠,王丕玉,张亚平;云南微小按蚊随机扩增多态DNA及遗传分化关系[J];动物学研究;1998年03期

2 胡红霞;孙立新;叶松;陆军;朱国强;杨庆贵;;蚊AFLP技术体系的建立[J];中国国境卫生检疫杂志;2012年01期

3 瞿逢伊;蚊虫分子分类研究进展[J];寄生虫与医学昆虫学报;1996年01期

4 张全启,徐晓斐,齐洁,王兴莲,包振民;牙鲆野生群体与养殖群体的遗传多样性分析[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2004年05期

5 马洪雨;陈松林;田永胜;季相山;;我国引进条斑星鲽群体遗传多样性的AFLP分析[J];水产学报;2008年03期

6 罗成;刘锦;顾蔚;张琛;王U喼

本文编号：323542