低氧状态下骨细胞参与破骨细胞形成的作用机制研究

发布时间：2021-06-24 03:01

　　目的探究低氧状态下骨细胞对破骨细胞形成的作用及其机制。方法用去铁胺甲磺酸（DFO）刺激骨细胞系MLO-Y4建立体外低氧骨细胞培养体系。CCK-8实验检测DFO对MLO-Y4细胞增殖活性的影响;采用DFO处理后的MLO-Y4细胞培养液制备条件培养基诱导RAW264.7细胞分化,行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测;利用实时荧光定量聚合酶链反应、细胞免疫荧光和蛋白质印迹（Western blot）检测DFO作用下MLO-Y4表达低氧诱导因子（HIF）-1α与核因子κB受体活化因子配体（RANKL）的情况;检测HIF-1αsiRNA转染对MLO-Y4表达HIF-1α和RANKL的影响。结果 100μmol·L^-1 DFO作用24 h时MLO-Y4增殖活性升高,之后随着时间延长细胞增殖活性下降（P<0.01）。加入可溶性RANKL后,低氧组可见破骨细胞形成明显增加（P<0.001）。100μmol·L^-1 DFO作用下,HIF-1αmRNA表达稳定,RANKL mRNA的表达随时间明显变化,24 h时最高（P<0.01）;HIF... 

【文章来源】：华西口腔医学杂志. 2019,37(05)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 实验对象及主要试剂
    1.2 细胞培养与处理
    1.3 细胞计数(cell counting kit-8,CCK-8)实验
    1.4 条件培养基制备和破骨细胞诱导
    1.5 实时荧光定量PCR
    1.6 细胞免疫荧光检测
    1.7 Western blot分析
    1.8 统计分析
2 结果
    2.1 低氧对MLO-Y4细胞增殖的影响
    2.2 低氧状态下siRNA转染对破骨细胞生成的影响
    2.3 低氧对MLO-Y4细胞表达HIF-α、RANKL mRNA及蛋白的影响
    2.4 低氧状态下si RNA转染对MLO-Y4细胞表达HIF-α、RANKL的影响
3 讨论



本文编号：3246226