新型树形高分子和聚磷酰胺基因传递载体的研究

发布时间：2021-06-24 23:38

　　基因治疗是一种为病人体细胞提供所需的基因物质,使其能够产生纠正或调节疾病的特异性蛋白的方法。近年来,越来越多的基因治疗研究已经在基础研究和临床研究方面取得巨大的进展。这些研究进展使基因治疗有希望成为治疗遗传或后天疾病（如心血管病和癌症等）的有效手段。 自从科学家成功完成人类基因组序列图后,基因治疗从治疗基因的克隆研究转移到了基因传递的研究。在基因治疗领域中,基因传递系统被用来将编码治疗蛋白序列的外源DNA引入到靶向细胞内,使之得到有效表达。目前已经发展了几种基因传递系统来促进体外或体内的基因表达。其中,病毒载体转染效率高,被用于首例人类基因治疗实验。然而,病毒载体的安全隐患（包括免疫原反应以及病毒自我复制的风险）和复杂昂贵的制备过程都限制了病毒载体的使用。这些不足促使人们致力于发展非病毒基因传递系统,如阳离子脂质体,聚合物及其它机械或电子相关的基因传递系统。在非病毒基因传递系统中,新型的生物相容的高分子基因载体得到了越来越多的关注。 尽管高分子基因载体在安全,免疫原反应和突变方面优越于病毒载体,但通常高分子基因载体的细胞毒性较高,转染效率较低。高分子载体用于基因治疗的主要限... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：149 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

阳离子高分子将DNA紧密复合成棒状、环状、球状的复合物粒子，然后通过胞吞作用进入细胞膜，在细胞内传递的一般过程

缓冲溶液PBS7.4中混合，室温下放置0.sh后，形成不同N/P比的树形分子/pNDA复合物(N/P比值是指树形分子中带正电的伯氨基与pDNA中带负电的磷酸醋基的摩尔比值)，将此混合物进行凝胶电泳。图3显示了随着NP/比值的增加，各代树形分子/pDNA复合物的凝胶电泳结果。当N/P比值小于1时，聚阳离子树形分子G4，G5或G6与聚阴离子DNA通过静电相互作用形成复合物，ONA的负电荷部分被中和，但是尚有部分游离DNA在外加电场作用下产生位移;一且N沪比值大于或等于l，质粒DNA在凝胶上的位移被完全抑制。而G7或GS在N/P比值为0.75时就能抑制质粒DNA在凝胶上的位移。

形分子与质粒DNA在PBS7.4中形成不同NP/比值的复合物，在无血清的DMEM培养基中转染细胞4小时，细胞持续培养44小时后，测定细胞中表达的荧光素酶的活性。如图7所示，各代树形分子G4一GS/pONA复合物介导的转染效率很大程度上依赖于代数，并遵循G6>G7>GS>GS)G4的次序。在HeLa细胞中，G6介导的转染效率随着N/P比值增加而增加，在N/P为20时达到接近于市售的枝化尸EI的转染效


本文编号：3248042