miR-20a-5p调控结核分枝杆菌诱导巨噬细胞凋亡相关基因表达的研究

发布时间：2021-06-27 10:16

　　目的明确小非编码RNA（microRNA,miR-20a-5p）对结核分枝杆菌（MTB）诱导人巨噬细胞凋亡相关基因表达的调控作用。方法构建可表达或抑制miR-20a-5p、转染miR-20a-5p抑制剂（miR-20a-5p-inhibitor,简称"miR-20a-5p-inh"）、作为慢病毒载体的阴性对照（LV1-NC）的慢病毒载体,由oligo-dT引物通过固相亚磷酰胺法合成茎环寡核苷酸,并克隆到含绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒载体pGLV3-GFP内,将构建的miR-20a-5p、miR-20a-5 p-inh、LV1-NC转染THP-1人巨噬细胞3 h,培养72 h后用流式细胞仪分选出GFP+THP-1细胞,并分别采用减毒MTB菌株（H37Ra）感染8 h和过氧化氢（H₂O₂）处理30 min两种方法诱导。通过实时定量PCR技术测定细胞中线粒体相关抗凋亡基因Bcl-2,以及促凋亡基因Bax、Bim和Bad的转录水平。同时,用蛋白免疫印迹法检测细胞裂解物中相关蛋白的表达。结果慢病毒转染细胞后,在无刺激的THP-1细胞中miR-20a-... 

【文章来源】：中国防痨杂志. 2019,41(07)CSCD

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本文编号：3252657