脲原体感染与非淋菌性尿道炎的Meta分析及PCR-ELISA检测法的初步建立

发布时间：2017-04-25 20:17

  本文关键词：脲原体感染与非淋菌性尿道炎的Meta分析及PCR-ELISA检测法的初步建立，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 探讨解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum, Uu)、微小脲原体(Ureaplasma parvum, Up)感染与男性非淋菌性尿道炎(nongonococcal urethritis, NGU)的相关性,通过系统性回顾分析,揭示在男性非淋菌性尿道炎中Uu, Up感染对疾病的作用,为鉴别检测Uu和Up提供依据。通过将传统的PCR检测方法与微孔板核酸杂交以及酶显色技术相结合,建立起用于Uu, Up检测和鉴别的PCR-ELISA方法,并对该方法进行初步的临床应用性评价。 方法 采用Meta分析的方法,检索2000-2011年公开发表的有关Uu,Up感染与男性非淋菌性尿道炎的文献,并应用Review Manager5.0软件进行综合定量评价,计算其优势比(OR)等。应用生物素标记的U4,U5引物进行PCR扩增,利用Primer在线软件反向查出Uu,Up扩增出的核酸序列并根据NCBI在线Blast软件设计出Uu,Up特异性捕获探针,将捕获探针包被到DNA-BINDTM微孔板上并与PCR产物进行杂交,引入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素检测系统进行显色,从而初步构建出PCR-ELISA检测方法。通过对生殖支原体G37、β-溶血性链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌等参考菌和Uu代表菌株血清型8,Up代表菌株血清型3进行PCR-ELISA方法检测以验证该方法的特异性。同时随机选取了天津医科大学第二医院计划生育科不孕症检查的38例女性阴道拭子样本用于初步评估本方法的临床有效性。 结果 本次Meta分析共纳入中英文文献11篇包括病例组研究对象1824例和对照组研究对象1584例。脲原体(Uu+Up)总体感染率与NGU的关系合并OR值为1.23,95%CI(0.91,1.68),显著性检验P=0.18。其中Uu感染与NGU的关系OR值为1.65,95%CI(1.10,2.47,),显著性检验P=0.02,而Up感染与NGU的关系OR值为0.57,95%CI(0.45,0.72),显著性检验P0.00001。本研究自行设计了用于检测鉴别Uu和Up的捕获探针,序列如下,Uu捕获探针：5'AGC AAT TAA CTT CGC TGAAGG C3'; Up捕获探针：5'GGC AAT TAA TTT CGC TAG TGG T3'。同时利用U4,U5引物对,Uu, Up捕获探针和DNA-BINDTM微孔板等初步构建出PCR-ELISA法用于检测和鉴别Uu,Up。在特异性实验中,本法可较好的区分检测Uu和Up,并且不与其他参考菌发生非特异性扩增或杂交反应。随后,应用38例随机选取的女性阴道拭子样本,初步评估了所建PCR-ELISA方法的临床有效性,其中检出阳性样本26例,包括Up感染21例,Uu感染3例,Uu, Up共感染2例,阴性结果12例,阳性检出率为68.42%。本方法与传统的培养法相比,应用Kappa检验进行一致性验证,Kappa值为0.687。以培养法为检测标准则PCR-ELISA法敏感度为88.89%(24/27),特异度为81.82%(9/11)。 结论 Uu主要分布在NGU组中,与Up相比具有更高的致病力,是男性非淋菌性尿道炎的致病因子之一；而Up则有相对较低的毒性,多以寄居的形式存在。因此,进行Uu和Up区分检测对于流行病学调查和致病机制的研究将具有重要意义。本研究将PCR扩增、微孔板核酸杂交和酶显色技术相结合初步构建出PCR-ELISA检测方法用于检测和鉴别Uu, Up。与传统培养法相比,PCR-ELISA法能有效的进行脲原体的检测并可同时鉴别出Uu和Up。本方法操作简单,无需特殊的仪器设备并且所需试剂均为商品化产品。本研究所建立的PCR-ELISA法通过一对特异性捕获探针将Uu和Up检测和鉴别出来,与以往的PCR-ELISA法相比无需引入地高辛及其抗体,不仅减少了操作步骤,而且成本经济效应较好,适合推广到各类基层医学微生物实验室。本法是一种有效的Uu, Up检出和鉴别工具,可作为目前临床Uu, Up检测的重要补充方法。
【关键词】：解脲脲原体 微小脲原体 非淋菌性尿道炎 Meta分析 PCR-ELISA
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392;R695
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、解脲脲原体微小脲原体与非淋菌性尿道炎关系Meta的分析15-24
• 1.1 材料和方法15
• 1.1.1 资料来源15
• 1.1.2 文献纳入与剔除标准15
• 1.1.3 统计学处理15
• 1.2 结果15-21
• 1.2.1 文献基本情况15-16
• 1.2.2 各种研究结果的异质性检验16
• 1.2.3 脲原体与NGU的关系16
• 1.2.4 Uu感染与NGU的关系16
• 1.2.5 Up感染与NGU的关系16-21
• 1.3 讨论21-23
• 1.4 小结23-24
• 二、PCR-ELISA法检测鉴别解脲脲原体微小脲原体方法的初步建立24-38
• 2.1 材料和方法24-29
• 2.1.1 实验材料24-26
• 2.1.2 试验方法26-29
• 2.1.3 统计学处理29
• 2.2 结果29-34
• 2.2.1 Up,Uu特异性捕获探针设计29-30
• 2.2.2 PCR-ELISA方法特异性验证30-31
• 2.2.3 临床样本培养结果31
• 2.2.4 临床样本PCR-ELISA法检测结果31-34
• 2.3 讨论34-37
• 2.4 小结37-38
• 结论38-39
• 参考文献39-44
• 发表论文和参加科研情况说明44-45
• 附录45-46
• 综述46-66
• 综述参考文献58-66
• 致谢66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 曾文军;陈群;皮红泉;梅艳娟;王柳均;曹玉平;;解脲脲原体生物群及抗精子抗体与男性不育的相关性探讨[J];山东医药;2011年07期

  本文关键词：脲原体感染与非淋菌性尿道炎的Meta分析及PCR-ELISA检测法的初步建立，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：327026