表面电荷对纳微球佐剂效果的影响之细胞水平研究

发布时间：2017-04-25 20:10

  本文关键词：表面电荷对纳微球佐剂效果的影响之细胞水平研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目前疫苗佐剂的发展包括优化抗原至抗原提呈细胞（APCs）（如巨噬细胞）的递呈途径。纳微球作为佐剂成为近年来疫苗递呈系统研究的大热点。本课题采用乙肝表面抗原为模型抗原，首次探讨了巨噬细胞对粒径均的不同表面电荷聚乳酸（PLA）纳微球的摄取行为以及活化情况。 首先利用快速膜乳化技术，制备得到了PLA纳微球，纳微球粒径均 性好、表面光滑、球形完整，其平均粒径为900nm，其多分散性指数为0.029。 然后将定量PLA纳微球分别添加到1%（w/v）的壳聚糖（CS）、壳聚糖盐酸盐（CSC）以及聚乙烯亚胺（PEI）溶液中，利用静电作用直接对微球镀层，使纳微球的表面带有正电荷。SEM和粒径分布结果表明修饰后对PLA纳微球形貌、粒径分布和分散性没有影响，但是PLA、PLA-CS、PLA-CSC、PLA-PEI的表面电荷依次增高。其中PLA的平均电位为-21.3mV，PLA-CS的平均电位为7.5mV，，PLA-CSC的平均电位为13.1mV，PLA-PEI的平均电位为31.7mV。 表面电荷的增加，显著的提高了PLA微球对HBsAg的吸附效率。空白PLA微球对HBsAg的吸附率仅为3.89%，采用壳聚糖和壳聚糖盐酸盐修饰的PLA微球，对HBsAg吸附率分别为23.97%和58.68%，而聚乙烯亚胺修饰的PLA微球对HBsAg的吸附效率可高达62.63%。 最后，采用三种巨噬细胞考察表面电荷对纳微球作为佐剂的效果影响。小鼠腹腔巨噬细胞的考察结果表明表面电荷的增加，有利于抗原的摄取，MHC I和MHC II的表达以及IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α这几种细胞因子的分泌，表明表面电荷的增加可更好的激活巨噬细胞，继而产生更强的免疫应答。
【关键词】：纳微球 佐剂 巨噬细胞 摄取 活化
【学位授予单位】：北京化工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392;TQ460.1
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 缩略词12-13
• 第一章 绪论13-24
• 1.1 本课题研究背景13-21
• 1.1.1 乙肝现状13
• 1.1.2 乙肝引起的免疫概述13-15
• 1.1.3 治疗性乙肝疫苗的研究现状15-17
• 1.1.4 疫苗佐剂概述17-19
• 1.1.5 纳微球作为佐剂的研究现状19-21
• 1.2 本课题的立题依据21-22
• 1.3 本课题的研究内容、目的和意义22-24
• 第二章 粒径均一可控的纳微球的制备和镀层修饰24-36
• 2.1 引言24-25
• 2.2 材料与方法25-29
• 2.2.1 实验材料25-26
• 2.2.1.1 实验试剂25
• 2.2.1.2 实验仪器（参见附录）25-26
• 2.2.2 微球的制备方法26-27
• 2.2.2.1 粒径为 900 nm 纳微球的制备26
• 2.2.2.2 粒径为 400 nm 纳米球的制备26-27
• 2.2.3 纳微球表面形貌观察27
• 2.2.4 纳微球粒径及分布测定27
• 2.2.5 PLA 纳微球 PVA 残留量测定27-28
• 2.2.6 PLA 纳微球的修饰28-29
• 2.2.7 FITC 标记抗原的制备29
• 2.2.8 抗原吸附29
• 2.2.9 乙肝表面抗原吸附率的测定29
• 2.3 结果与讨论29-34
• 2.3.1 所制备的粒径为 900 nm 微球29-30
• 2.3.2 所制备的粒径为 400 nm 微球30-31
• 2.3.3 PVA 的残留量31
• 2.3.4 修饰后 PLA 纳微球的表征31-33
• 2.3.5 修饰后 PLA 纳微球对抗原的吸附率33-34
• 2.4 本章小结34-36
• 第三章 纳微球表面电荷对巨噬细胞系 RAW 264.7 行为的影响36-49
• 3.1 引言36
• 3.2 材料与方法36-40
• 3.2.1 实验材料（参见附录）36
• 3.2.2 实验仪器（参见附录）36
• 3.2.3 CCK-8 法测 RAW 264.7 细胞活力36-37
• 3.2.4 巨噬细胞系 RAW 264.7 对抗原的吞噬实验37-38
• 3.2.4.1 流式细胞仪分析37-38
• 3.2.4.2 激光扫描共聚焦显微镜分析38
• 3.2.5 巨噬细胞系 RAW 264.7 表达的 MHC I、MHC II、CD80 和 CD8638-39
• 3.2.6 细胞因子的检测39
• 3.2.7 抗原与溶酶体的共定位实验39-40
• 3.3 结果与讨论40-47
• 3.3.1 RAW 264.7 细胞活力40
• 3.3.2 RAW 264.7 对抗原的吞噬效果40-44
• 3.3.3 巨噬细胞系 RAW 264.7 表达的 MHC I、MHC II、CD80 和 CD86 结果44-46
• 3.3.4 细胞因子的检测46
• 3.3.5 共定位结果46-47
• 3.4 本章小结47-49
• 第四章 纳微球表面电荷对巨噬细胞系 J774A.1 行为的影响49-54
• 4.1 引言49
• 4.2 材料与方法49-52
• 4.2.1 实验材料49
• 4.2.2 实验仪器 (参见附录)49-50
• 4.2.3 巨噬细胞 J774A.1 对抗原的吞噬实验50
• 4.2.4 巨噬细胞 J774A.1 表达的 MHC I 和 MHC II 的检测50-52
• 4.3 结果与讨论52-53
• 4.3.1 巨噬细胞 J774A.1 对抗原的吞噬结果52
• 4.3.2 巨噬细胞 J774A.1 表达的 MHC I 和 MHC II 的52-53
• 4.4 本章小节53-54
• 第五章 纳微球表面电荷对原代小鼠腹腔巨噬细胞行为的影响54-64
• 5.1 引言54
• 5.2 材料与方法54-57
• 5.2.1 实验材料 (参见附录)54
• 5.2.2 实验仪器 (参见附录)54
• 5.2.3 小鼠腹腔巨噬细胞的提取54-55
• 5.2.4 安全性实验55
• 5.2.5 抗原摄取情况的研究55-56
• 5.2.5.1 流式细胞仪的定量分析55
• 5.2.5.2 激光扫描共聚焦显微镜定性分析55-56
• 5.2.6 小鼠腹腔巨噬细胞表达的 MHC I 和 MHC II 的检测56
• 5.2.7 细胞因子的检测56-57
• 5.3 结果与讨论57-63
• 5.3.1 小鼠腹腔巨噬细胞的存活率57
• 5.3.2 流式细胞仪的定量分析结果57-58
• 5.3.3 激光扫描共聚焦显微镜定性分析结果58-59
• 5.3.4 小鼠腹腔巨噬细胞表达的 MHC I 和 MHC II 的结果59-61
• 5.3.5 细胞因子分泌的结果61-63
• 5.4 本章小节63-64
• 第六章 结论与创新性64-66
• 6.1 本论文主要结论64-65
• 6.2 本论文创新性65-66
• 第七章 问题与建议66-67
• 参考文献67-72
• 附录72-74
• 致谢74-75
• 研究成果及发表的学术论文75-76
• 作者及导师简介76-77
• 附件77-78

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