一种含RGD小肽RWR的设计、合成及功能初探

发布时间：2017-04-25 18:06

  本文关键词：一种含RGD小肽RWR的设计、合成及功能初探，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 1、设计一种新型的小肽RWR。 2、观测RWR对血小板聚集及血栓形成的影响。 3、探索RWR通过αIIbβ3抑制血栓形成的机理。 4、验证RWR的抗栓效果，为含RGD抗栓药物的研发提供理论依据。 方法： 1、RWR小肽的设计与合成 利用Fmoc固相法合成化学方法合成RWR，在RGD基础上，增加一个疏水性氨基酸和一个碱性氨基酸，序列特征为Arg-Gly-Asp-Trp-Arg，蛋白质一级结构为RGDWR，课题组将这种新的化合物命名为RWR，该小肽具有RGD结构，理论上具备通过血小板表面整合素αIIbβ3受体从而与血小板特异结合的能力。 2、RWR对血小板聚集的影响的体外量效关系 利用血小板聚集仪检测不同浓度RWR对血小板最大聚集率的影响。将家兔全血分离为PRP和PPP，用PPP校零后，在PRP管中加入相同剂量的血小板聚集诱导剂ADPNa2，再加入不同浓度的RWR，检测5min内的血小板最大聚集率。用同样的方法检测RWR对人血小板聚集率的影响。 3、RWR与替罗非班（tirofiban）、阿司匹林（aspirin）等传统药物相比较，作用于家兔血小板聚集率 分别用不同浓度的替罗非班和阿司匹林作用于体外分离出的血小板，计算出两者的半数有效抑制浓度（IC50），与我们合成的RWR药物的IC50相比较，观察RWR的作用强弱。 4、RWR对血小板聚集率影响的体内时效关系 给药前心脏取血测量血小板聚最大集率，将RWR耳缘静脉注射后，0h,0.25h,0.75h,1h,2h分别心脏取血，分别测量血小板最大聚集率。观察RWR在体内的代谢时长以及其作用时效。 5、RWR对血栓形成的影响 利用家兔动静脉血栓旁路循环模型和大鼠三氯化铁血栓模型研究RWR对血栓形成的影响。两种模型分别通过血栓重量和血栓内部结构变化分析RWR的作用效果。 6、RWR对血液中cGMP含量的影响 通过酶联免疫试剂盒来测定血液中cGMP的含量，了解血栓的变化，反映RWR的作用效果。 结果： 1、质谱分析证实RWR序列正确，高效液相色谱提示RWR的纯度97.06%。 2、血小板聚集实验显示随着RWR的浓度增大，，血小板最大聚集率逐渐降低。RWR较阿司匹林、替罗非班抗血小板聚集活性强。且与家兔血小板相比较，RWR对人血小板聚集率作用效果更显著。 3、兔子动静脉旁路循环实验表明，随着RWR浓度的增大，血栓重量逐渐减小且其作用较替罗非班强。大鼠三氯化铁血栓模型显示随着RWR的浓度增大，血管内的腔隙变小。 4、随着给药浓度RWR的上升，血浆中cGMP的含量逐渐增大。 结论： 1、合成全新小肽RWR，结构与设计相符。 2、血小板聚集实验证实RWR在体内外均具有明显抑制血小板聚集的特性，且与传统抗栓药物阿司匹林和替罗非班相比，RWR抗血小板聚集效果更强。 3、两种血栓模型实验证实RWR可以抑制血栓形成,且其对血栓重量的影响较替罗非班强，血浆中cGMP含量增大，验证了RWR抗血栓的效果。
【关键词】：RGD 小肽 合成 血栓 cGMP
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3411
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 英文缩略词表10-11
• 前言11-14
• 第一部分 RWR 的设计与合成14-23
• 摘要14-15
• 第一章 RWR 生产工艺15-20
• 1 目的与原理15
• 2 RWR 的合成方法15-17
• 3 RWR 合成过程中原料及试剂的选择17-20
• 第二章 RWR 的分离纯化与鉴定20-21
• 1 RWR的分离纯化20
• 2 RWR的定性表征鉴定20
• 3 RWR纯度检测20-21
• 第三章 结果21-23
• 1 RWR 生产工艺流程21
• 2 RWR 的鉴定21-22
• 3 RWR 分离纯化后产品的检测22-23
• 第二部分 RWR 药效学研究23-51
• 第一章 材料与方法23-32
• 1 实验材料23-26
• 2 实验方法26-32
• 第二章 实验结果32-51
• 1 不同浓度 RWR 在体外对小板最大聚集率的影响32-40
• 2 在体内 RWR 随着时间的推移，对血小板最大聚集率的影响40-43
• 3 动静脉旁路循环血栓模型中，RWR 对血栓重量的影响43-47
• 4 RWR 对大鼠血管组织结构的影响，组织病理学观察47-51
• 第三部分 讨论51-54
• 第四部分 结论54-55
• 参考文献55-58
• 综述58-72
• 参考文献68-72
• 个人简历72-73
• 致谢73

【参考文献】

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本文编号：326780