20-HETE通过δPKC诱导心肌细胞凋亡的研究

发布时间：2017-04-25 17:03

  本文关键词：20-HETE通过δPKC诱导心肌细胞凋亡的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：20-羟二十烷四烯酸（20-Hydroxyeicosatetraenoic acid，20-HETE），是细胞色素P450ω-羟化酶催化花生四烯酸（Arachidonic Acid，AA）代谢产生的一种小分子活性化合物，在调节心血管功能等方面具有重要作用。本实验室前期研究结果表明：20-HETE可经线粒体通路诱导心肌细胞凋亡；并证实20-HETE可经PKC依赖性途径诱导NADPH氧化酶衍生产物ROS产生增多，导致细胞凋亡。为了揭示δPKC亚型在20-HETE所诱导的心肌细胞凋亡中的作用，本文通过外源性加入δPKC抑制剂Rottlerin，研究δPKC对20-HETE诱导的心肌细胞凋亡以及20-HETE诱导的线粒体膜电位下降的作用。研究发现，20-HETE可经δPKC作用于线粒体通路诱导心肌细胞凋亡。方法及结果如下：1）利用酶标仪，以MTT比色法检测细胞存活率，结果发现20-HETE显著降低细胞存活率至74.04±5.03%，，而使用Rottlerin能够抑制20-HETE的这种作用，使存活率升至91.10±5.08%；2）利用激光共聚焦显微镜，以原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡率，结果发现20-HETE能够诱导心肌细胞凋亡，而Rottlerin能够显著抑制由20-HETE引起的心肌细胞凋亡作用；3）利用激光共聚焦显微镜，以JC-1为荧光探针检测线粒体膜电位，结果发现Rottlerin能够显著抑制由20-HETE引起的心肌细胞线粒体膜电位的下降。上述研究结果表明：δPKC介导了20-HETE诱导心肌细胞凋亡的线粒体通路。这为进一步完善20-HETE诱导心肌细胞凋亡的机制提供了理论依据。
【关键词】：20-HETE 心肌细胞凋亡 δPKC
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 引言7-11
• 材料和方法11-16
• 1、实验材料11-12
• 1.1 实验动物11
• 1.2 主要仪器11
• 1.3 试剂及药品11-12
• 1.4 主要溶液的配制12
• 2、实验方法12-16
• 2.1 乳鼠心肌细胞的原代培养12-13
• 2.2 MTT 比色法测定心肌细胞的凋亡13
• 2.3 TUNEL试剂盒检测细胞凋亡13-14
• 2.4 线粒体膜电位ΔΨm检测心肌细胞凋亡14-15
• 2.5 统计学处理方法15-16
• 实验结果16-20
• 1、Rottlerin 对 20-HETE 诱导的心肌细胞存活率下降的影响16-17
• 2、Rottlerin 对 20-HETE 诱导的心肌细胞凋亡的影响17-18
• 3、Rottlerin 对 20-HETE 诱导的心肌细胞线粒体膜电位ΔΨm 下降的影响18-20
• 讨论20-22
• 结论22
• 创新点22-23
• 参考文献23-25
• 英文缩写25-26
• 致谢26

【参考文献】

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1 张迪;霍洪亮;张英妮;曾庆华;;20-羟二十烷四烯酸在机体生理及病理调节中的作用[J];生理科学进展;2007年02期

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4 李云峰;PKC在细胞凋亡中的作用[J];中国老年学杂志;2004年01期

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本文编号：326666