临床应用PRP制备方法的比较研究

发布时间：2017-04-25 12:04

  本文关键词：临床应用PRP制备方法的比较研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：用对兔脂肪干细胞（adipose-derived stem cells， ADSCs）增殖的影响来验证Tubex和传统二次离心法制备自体富血小板血浆（platelet-rich plasma，PRP)各自生物学效应，来探讨一种安全、快速、高效制备PRP的方法。 方法：1选用新西兰大白兔，雄性，取兔附睾部区脂肪垫，Ⅰ型胶原酶消化法培养兔ADSCs，并观察细胞形态特征。 2选取P4第4代ADSCs进行成脂、成骨诱导分化及染色来鉴定ADSCs。 3PRP的制备采用兔心脏穿刺抽血，，二次离心的方法,并行血小板计数及血小板回收率的计算。 4将第4代细胞分为空白组(完全培养基180μl+单纯DMEM培养基20μl)；对照组（细胞180ul+单纯DMEM培养基20ul）、全血组（细胞180ul+全血血浆20ul）、Tubex制备的PRP组（细胞180ul+PRP20ul）、传统二次离心法制备的PRP组（细胞180ul+PRP20ul）。采用CCK-8法(Cell-Counting Kit-8)检测不同作用时间（24h、48h、72h）各组对ADSCs增殖活动的影响。 5将全血、Tubex制备的PRP及传统二次离心法制备的PRP采用双抗夹心法（ELISA）检测其中血小板源性生长因子（platelet derived growth facto，PDGF-AB）的浓度。 结果：1原代细胞提取后镜下观其形状为圆形、大小不等。培养24小时后可见有少量的细胞贴壁形状为不规则细长型，可有像伪足一样的突起。3天后镜下观大量细胞已经贴壁生长，形状为比较细的长梭形，细胞开始增大并可见核分裂相，梭形细胞逐渐增多。5天后细胞的密度明显增加，呈现出团簇状、并向各个方向伸展形成集落，大小不一，多为长梭形。细胞融合在80％-90%时即可胰酶传代。 2成骨诱导三周茜素红染色呈阳性，成脂诱导两周油红O染色呈阳性， 3全血血小板计数为（260.2±96.8）×109/L；传统二次离心法提取的PRP血小板计数为(1508.8±557.0)×109/L; Tubex提取的PRP血小板计数为（3140.0±291.5）×109/L。Tubex制备的PRP血小板计数是全血的12.06倍，是传统二次离心法制备的PRP的2.08倍 4按血小板回收率计算公式计算Tubex制备的PRP和传统二次离心法制备的PRP的回收率，结果：Tubex制备的PRP血小板回收率为82.86％，传统方法回收率为72.54％。 5CCK-8法显示Tubex提取的PRP与传统二次离心法提取的PRP对ADSCs有明显的增殖作用。Tubex提取的PRP组在与传统组比较，其差异有显著地统计学意义（P＜0.01）。 6PRP中血小板源性生长因子PDGF-AB的浓度采用ELISA法检测，结果显示：Tubex制备的PRP中PDGF-AB的浓度明显高于传统二次离心法制备的PRP及全血PDGF-AB的浓度，其差异均有显著地统计学意义（P＜0.01）。 结论：1提取兔附睾部区脂肪垫分离培养的细胞，经诱导分化并染色鉴定证实为ADSCs。 2通过Tubex和传统二次离心法成功提取兔PRP，经血小板计数及ELISA法检测其中血小板生长因子PDGF-AB的浓度，证实Tubex是一种更加快速、安全、高效制备PRP的方法。 3Tubex制备的PRP与传统方法制备的PRP相比，能够更加高效，快速的促进ADSCs的增殖。
【关键词】：Tubex 富血小板血浆 脂肪干细胞 细胞增殖 PDGF-AB
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-12
• 材料和方法12-17
• 1. 材料12-14
• 1.1 实验动物12
• 1.2 实验试剂12
• 1.3 实验仪器12-13
• 1.4 主要试剂及配制13-14
• 2. 方法14-17
• 2.1 兔脂肪来源干细胞的分离与培养14-15
• 2.2 PRP 的制备15-16
• 2.3 兔脂肪来源干细胞的增殖实验（CCK-8）16
• 2.4 双抗体夹心检测 PDGF-AB 的浓度16-17
• 结果17-20
• 1.原代及传代细胞形态17-18
• 2.ADSCs 诱导染色18-19
• 3.全血和 PRP 血小板计数19
• 4.血小板回收率的计算19
• 5.兔脂肪来源干细胞的增殖实验的结果19-20
• 6.双抗体夹心（ELISA 法）检测 PDGF-AB 的浓度的结果20
• 讨论20-23
• 结论23-24
• 参考文献24-26
• 综述26-34
• 参考文献31-34
• 致谢34-35

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 田卫东,王大章,乔鞠,陈伟辉;生长因子网络调节对骨形成作用的研究 Ⅲ.bFGF对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响[J];华西口腔医学杂志;1998年04期

2 卢萌;陈伟辉;王承勇;曲延征;;不同离心方法制备富血小板血浆对血小板浓度及其活性的影响[J];中国口腔种植学杂志;2008年04期

3 朱茄英;谌柳萍;;扎止血带抽血对血小板测定值的影响[J];实用临床医学;2006年03期

4 刘静静 ,刘巧玲;血小板计数参考值调查及生理性波动的观察[J];中原医刊;2002年09期

5 王悦;朱U

本文编号：326266