丙型肝炎病毒多表位疫苗研究—重组抗原PCXZ及DNA疫苗pDNA-PCXZ在BALB/c体内的免疫原性
发布时间：2021-07-10 14:22
丙型肝炎病毒（HCV）为单股正链RNA病毒是丙型肝炎的病原体。HCV具有高度遗传多态性,能够迅速突变逃逸宿主的免疫应答,给疫苗的研究带来许多的困难。基于现有的对控制HCV感染有关机制的认识,疫苗应当具有诱导多种特异性和强烈的细胞免疫应答的能力,也就是CD4+和CD8+T细胞反应,并结合强烈的交叉中和抗体应答。本文在前期构建的HCV多表位抗原PCX的基础上新增了三段保守的HCVB/T细胞免疫表位,形成了HCV多表位肽段PCXZ。重组表达得到的多表位抗原PCXZ具有较高阳性HCV识别率的抗原特异性。以PCXZ抗原免疫BALB/c小鼠,在小鼠体内激发出基于Th2的强烈的体液免疫应答,同时也有效诱导了特异性的CD4+和CD8’T细胞免疫应答。三段新增表位中Pa表位显示出良好的B和T细胞免疫应答效果。弗氏佐剂作为PCXZ抗原的免疫佐剂,对体液免疫的影响不显著,而对T细胞免疫应答有一定的增强作用,但是并不足以改变免疫应答形式,仍以Th2免疫应答为主。质粒DNA （pDNA）疫苗能够同时诱导体液免疫和细胞免疫应答,尤其是激活了强烈的Thl型CD4+和CD8+T细胞的免疫应答。本文第三部分将合成的多表...
【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－３?ＨＣＶ基因组組成??Ｆｉｇ．?１－３?ＨＣＶ?ｇｅｎｏｍｅ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．?（Ａ）?Ｔｈｅ?ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅ?
的保护作用。本文选择的Ｓ段表位联合之前的五段表位均非常保守。将重组表达??的多表位抗原ＰＣＸＺ分别同３０份临床ＨＣＶ患者的血清、２２份正常人血清已经??７例ＨＢＶ患者血清进行ＥＬＩＳＡ筛选，结果见图２－３Ｂ，３０份临床ＨＣＶ患者的血??清标本中，５例呈阴性反应；２２份正常人血清样品中仅１例呈弱阳性反应；而７??份抗－ＨＢＶ表面抗原阳性血清样本中，无一例能被ＰＣＸＺ阳性识别。重组多表位??蛋白ＰＣＸＺ的阳性检出率可达８３．３％，表明ＰＣＸＺ抗原能较广泛地被ＨＣＶ患者??血清阳性识别。??Ａ?ＨＣＶ?ｈｅａ?化?ｙ??ｐａｔｉｅｎｔ?ｓｕｂｊｅｃｔ??３５?ｋＤ??胃??２５?ｋＤ???－—ＰＣＸＺ??化．４１０——??１４．４?ｋＤ??？??巳??＾２：００?????？?———————————’…—??■?■??１．５０?－?■??￡?■??５?－■??安?１．００?－??Ｏ?？?■??０．５０?－?■?■?■??？式Ｉ?＂＂’’ＩＩＩ—Ｉ—Ｉ”’．’ｒ，?？?■?、??０．００?－?＊??Ｎ?刖?ｍａｌ?ＨＣＶ＋?
或阳ｉｓｐｌａｙ载体相连，前者构建ｐＶａｘｌ／ｃ－ｐｃｘｚ质粒，后者ｐＤｉｓｐｌａｙ／ｐｃｘｚ为模板，??ＰＣＲ扩增其中包含的Ｉｇ?Ｋ链前导序列、ｐｃｘｚ?Ｗ及ＰＤ畑Ｒ片段，形成ｍ节ＣＸＺ片??段，然后将ｍ－／？ｃｘｚ再克隆至ｐＶａｘｌ载体内构建ｐＶａｘｌ／ｍ－ｐｃｘｚ质粒。图３－２为ＰＣＲ??扩增的Ｃ－／７ＣＸＺ和片段。各克隆片段经ＤＮＡ测序证明完全正确。??Ｍ?１?２?３??１０００?郎一??ｂｐ—??—夺?ｍ－ｐｃｘｚ?７１１?ｂｐ??合?ｃ－ｐｃｘｚ?４巧?ｂｐ??２５０?ｂｐ—??１００?ｂｐ?—??图３－２?ＰＣＲ扩増基因ｐｃｘｚ片段??Ｆｉｇ．３－２?Ｔｈｅ?／？ＣＡ：ｚ?ｆｒａｇｍｅｎ权?ａｍｐＨｆｉｅｄ?ｂｙ?ＰＣＲ．?Ｌａｎｅ?Ｍ，化ｅ?ＤＮＡ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｗｅｉｇｈｔ?ｍａｒｉｃｅｒｓ；??Ｌａｎｅ?２，化ｅ?ｏ／？ｃｘｚ；?Ｌａｎｅ?３，化ｅ?ｍ－?／７ＣＸＺ；?Ｌａｎｅ?３，化ｅ?打ｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ．??２．
【参考文献】：
期刊论文
[1]丙型肝炎病毒感染的流行病学[J]. 付涌水. 中国输血杂志. 2009(11)
[2]丙型肝炎病毒的流行病学[J]. 刘丽君,魏来. 传染病信息. 2007(05)
[3]Epidemiology of hepatitis C virus infection[J]. Miriam J Alter. World Journal of Gastroenterology. 2007(17)
[4]Elicitation of strong immune responses by a DNA vaccine expressing a secreted form of hepatitis C virus envelope protein E2 in murine and porcine animal models[J]. Hye Na Kang,Lorne A Babiuk. World Journal of Gastroenterology. 2006(44)
[5]MHC Class Ⅰ Antigen Presentation-Recently Trimmed and Well Presented[J]. Barry Flutter. Cellular & Molecular Immunology. 2004(01)
[6]Specific immune responses induced by a multi-epitope antigen of hepatitis C virus in mice and rabbits[J]. KazunariK.Yokoyama. Chinese Science Bulletin. 2000(10)
本文编号：3276080
【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－３?ＨＣＶ基因组組成??Ｆｉｇ．?１－３?ＨＣＶ?ｇｅｎｏｍｅ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．?（Ａ）?Ｔｈｅ?ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅ?
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【参考文献】：
期刊论文
[1]丙型肝炎病毒感染的流行病学[J]. 付涌水. 中国输血杂志. 2009(11)
[2]丙型肝炎病毒的流行病学[J]. 刘丽君,魏来. 传染病信息. 2007(05)
[3]Epidemiology of hepatitis C virus infection[J]. Miriam J Alter. World Journal of Gastroenterology. 2007(17)
[4]Elicitation of strong immune responses by a DNA vaccine expressing a secreted form of hepatitis C virus envelope protein E2 in murine and porcine animal models[J]. Hye Na Kang,Lorne A Babiuk. World Journal of Gastroenterology. 2006(44)
[5]MHC Class Ⅰ Antigen Presentation-Recently Trimmed and Well Presented[J]. Barry Flutter. Cellular & Molecular Immunology. 2004(01)
[6]Specific immune responses induced by a multi-epitope antigen of hepatitis C virus in mice and rabbits[J]. KazunariK.Yokoyama. Chinese Science Bulletin. 2000(10)
本文编号：3276080
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