急性呼吸窘迫综合征小鼠肺内源性干细胞表达水平的研究

发布时间：2021-07-12 12:04

　　目的探讨急性呼吸窘迫综合征（ARDS）小鼠肺组织中肺内源性干细胞的表达水平。方法 10只C57BL/6小鼠分成两组:实验组和对照组,实验组通过气管内注射脂多糖（LPS）构建小鼠ARDS模型,采用气管内注射PBS作为对照组;采用胶原酶、热消化法消化小鼠肺组织获取小鼠肺单细胞悬液;双重免疫荧光染色方法鉴定小鼠肺组织中sca-1+CD31-CD45-细胞;流式细胞术对肺sca-1+CD31-CD45-细胞进行分选。采用方差分析及独立t检验进行统计学分析。结果通过气管内注入LPS成功制作小鼠急性ARDS模型;5只小鼠的全肺组织制备单细胞悬液总数目达5×107个/ml,活细胞百分比为98﹪;肺内源性干细胞包括Ⅱ型肺泡上皮细胞、clara细胞以及支气管肺泡干细胞等,通过肺组织双重免疫荧光染色,验证小鼠肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞、clara细胞以及支气管肺泡干细胞;对照组及实验组各样本肺内源性干细胞数目占单细胞悬液细胞数比例呈正态分布,且实验组肺内源性干细胞数目水平（10.73±10.65）﹪较对照组水平（12.23±0.73）﹪降低（t=-3.405,P <0.01）。结论 ARDS时,小鼠肺内... 

【文章来源】：中华细胞与干细胞杂志(电子版). 2019,9(04)

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【部分图文】：

奥林巴斯光学显微镜下观察小鼠肺组织

·202·中华细胞与干细胞杂志(电子版)2019年8月第9卷第4期ChinJCellStemCell(ElectronicEdition),Aug2019,Vol.9,No.4注：a~c图为对照组，d~f图为实验组，实验组较对照组小鼠肺组织肺泡间隔破坏较明显，肺泡间隔见肺毛细血管、肺泡间隔明显增厚，肺泡腔及肺间质内出现明显的炎性细胞浸润及大量红细胞；a，d图放大40倍，b，e图放大200倍，c，f图放大400倍图1奥林巴斯光学显微镜下观察小鼠肺组织（HE染色）注：a图为蓝色荧光表示细胞核；b图为绿色荧光为SP-C抗体标记，表示Ⅱ型肺泡上皮细胞；c图为中红色荧光为CAA抗体标记，表示clara细胞；d图为黄色荧光为SP-C、CCA双阳性细胞，即支气管肺泡干细胞图2奥林巴斯荧光显微镜下观察肺组织（双重免疫荧光染色，×200）

·204·中华细胞与干细胞杂志(电子版)2019年8月第9卷第4期ChinJCellStemCell(ElectronicEdition),Aug2019,Vol.9,No.4注：a图为实验组空白对照；b图为加入CD45抗体，R2为从肺细胞中分选出除白细胞（CD45+）之外的细胞群（CD45-细胞）；c图中R3指CD31-sca-1+细胞群，通过CD31-标记除去血管内皮细胞；d图中R4指CD45+阳性细胞群图4实验组样本肺内源性干细胞（sca-1+CD31-CD45-cells）流式细胞图染色；免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，荧光显微镜下即可观察到荧光，以此来进行组织或细胞内抗原物质的定位。在实验结果中，根据只加二抗的阴性对照排除背景染色及非特异性染色之外，可以看到肺组织中细胞显示绿色荧光的为Ⅱ型肺泡上皮细胞，细胞显示红色荧光的为clara细胞，显示黄色荧光的为支气管肺泡干细胞[11-12]，因此验证了小鼠肺组织中肺sca-1+CD31-CD45-细胞的存在，为下一步流式细胞术分选肺内源性干细胞提供了理论基础支持。关于ARDS中肺内源性干细胞的变化鲜有报道，根据目前国内外研究结果，其表面标记为scal+CD31-CD45-分子较多[13]，为了得到纯度较高的细胞，采用流式细胞分选仪进行分眩实验结果表明，ARDS小鼠肺scal+CD31-CD45-细胞占肺总细胞的比例较对照组下降。而Qian等[14]实验中证实人肺腺癌组织中肺内源性干细胞的数目高于癌旁组织，其具体原因及机制尚不清楚，需进一步研究。Deng等[15]在香烟提取物致肺气肿小鼠肺sca-

【参考文献】：
硕士论文
[1]急性肺损伤后内源性肺干/祖细胞的动态变化及其修复作用[D]. 李海胜.第三军医大学 2013



本文编号：3279880