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阿特拉津与氨苄青霉素单抗制备、鉴定及ELISA方法的初步建立

发布时间:2021-07-12 20:08
  食品安全和人类的健康息息相关,而在食品安全中农兽药的残留检测又是重中之重。本研究制备了具有代表性的三嗪类农药——阿特拉津、β-内酰胺类兽药——氨苄青霉素的单克隆抗体,对抗体进行了纯化和性质鉴定,并对纯化后抗体的应用进行了初步研究。为进一步的检测工作奠定了基础。本研究的目的是制备高特异性的阿特拉津、氨苄青霉素单克隆抗体。实验内容主要包括半抗原的改造及鉴定、完全抗原的合成及鉴定、实验动物的免疫、分泌单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立、单克隆抗体的制备、纯化、性质鉴定及ELISA检测方法的初步建立等。本研究首先将阿特拉津进行羧基化修饰,用3-巯基丙酸取代阿特拉津结构上的氯原子,并对羧基化的阿特拉津运用红外光谱、核磁共振氢谱及质谱进行鉴定。用DCC法将羧基化阿特拉津与载体蛋白BSA、OVA偶联,对获得的完全抗原进行紫外光谱扫描及SDS-PAGE鉴定。计算人工合成完全抗原的偶联比为AT:BSA=20:1。用生物合成法将氨苄青霉素与载体蛋白BSA、OVA偶联,用紫外光谱扫描及SDS-PAGE等方法对获得的完全抗原进行鉴定。计算人工合成完全抗原的偶联比为Amp:BSA=12.1:1。实验动物的免疫采用完全... 

【文章来源】:中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】:99 页

【学位级别】:硕士

【文章目录】:
缩略词表
摘要
Abstract
前言
    1 概述
        1.1 阿特拉津概述
        1.2 氨苄青霉素概述
    2 主要研究思路和方法
        2.1 研究技术路线
        2.2 主要研究方法
    3 研究目的和意义
第一章 完全抗原的合成、鉴定及动物免疫
    实验一 阿特拉津完全抗原的合成、鉴定及动物免疫
        1 材料
            1.1 实验动物
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器及耗材
            1.4 主要溶液的配制
        2 方法
            2.1 阿特拉津的羧基化
            2.2 羧基化阿特拉津的鉴定
            2.3 阿特拉津完全抗原的制备
            2.4 阿特拉津完全抗原的鉴定
            2.5 完全抗原的蛋白定量
            2.6 动物免疫
            2.7 实验动物血清效价的测定
        3 结果
            3.1 羧基化阿特拉津的鉴定结果
            3.2 阿特拉津完全抗原鉴定结果
            3.3 完全抗原的蛋白定量
            3.4 实验动物血清效价测定结果
        4 结论与讨论
    实验二 氨苄青霉素完全抗原的合成、鉴定及动物免疫
        1 材料
            1.1 实验动物
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器及耗材
            1.4 主要溶液的配制
        2 方法
            2.1 完全抗原的制备
            2.2 完全抗原的鉴定
            2.3 完全抗原的蛋白定量
            2.4 实验动物的免疫及血清效价测定
        3 结果
            3.1 完全抗原的鉴定结果
            3.2 完全抗原的蛋白定量
            3.3 实验动物血清效价的测定结果
        4 结论与讨论
第二章 单克隆抗体的制备
    1 材料
        1.1 融合用细胞
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器及耗材
        1.4 主要溶液的配制
    2 方法
        2.1 杂交瘤细胞株的建立
        2.2 单克隆抗体的制备
    3 结果
        3.1 杂交瘤细胞筛选与克隆的结果
        3.2 杂交瘤细胞分泌抗体稳定性测定结果
        3.3 杂交瘤细胞的染色体分析结果
        3.4 杂交瘤细胞的冻存与复苏
    4 结论与讨论
第三章 单克隆抗体的纯化、性质鉴定及ELISA 方法的初步建立
    1 材料
        1.1 主要试剂
        1.2 主要仪器及耗材
        1.3 主要试剂的配制
    2 方法
        2.1 单克隆抗体的纯化
        2.2 单克隆抗体的性质鉴定及ELISA 方法的初步建立
        2.3 单克隆抗体的保存
    3 结果
        3.1 阿特拉津单克隆抗体纯化结果
        3.2 氨苄青霉素单克隆抗体纯化结果
        3.3 阿特拉津单克隆抗体性质鉴定及标准曲线的建立
        3.4 氨苄青霉素单克隆抗体性质鉴定及ELISA 方法的初步建立
    4 结论与讨论
讨论
结论
参考文献
文献综述
    小分子农兽药免疫检测研究进展
    参考文献
个人简历
致谢


【参考文献】:
期刊论文
[1]《资源环境与发展》稿约[J].   资源环境与发展. 2008(01)
[2]免疫分析法在农药残留检测中的应用及前景[J]. 王升吉,杨崇良,尚佑芬,马立平,孙红炜,张友军.  山东农业科学. 2005(04)
[3]牛奶抗生素残留快速检测技术进展及应用现状[J]. 叶兴乾,刘东红,陈健初.  农业工程学报. 2005(04)
[4]阿特拉津在土壤中的环境行为研究进展[J]. 毛应明,蒋新,王正萍,王芳,邓建才.  环境污染治理技术与设备. 2004(12)
[5]分子印迹-仿生传感器的研究进展[J]. 何永红,高志贤,晁福寰.  分析化学. 2004(10)
[6]免疫分析法及其在药物滥用检测中的应用[J]. 叶磊.  中国法医学杂志. 2004(02)
[7]分子印迹技术及其在生物化工领域的应用现状与展望[J]. 董文国,张敏莲,刘铮.  化工进展. 2003(07)
[8]阿特拉津生产方法综述[J]. 严海昌.  浙江化工. 2003(04)
[9]除草剂阿特拉津的环境毒理研究进展[J]. 刘爱菊,朱鲁生,王军,孙瑞莲,林爱军.  土壤与环境. 2002(04)
[10]水中内分泌干扰物在我国的研究进展[J]. 周鸿,张晓健,王占生.  中国给水排水. 2002(09)



本文编号:3280576

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