分子生态学技术在益生菌功能评价的应用研究

发布时间：2017-04-26 14:05

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【摘要】：肠道菌群是构筑肠道粘膜屏障的主要组成部分,在维持肠道功能及机体的健康方面发挥着重要的生理意义。益生菌具有通过生物拮抗纠正微生态失衡达到治疗肠道菌群失调的功效,且可以避免抗生素应用的副作用,具有极大的发展潜力。目前,益生菌在消化道内的作用机理尚不明确,单纯通过体外微生物培养,很难全面认识某种益生菌的作用。本实验以植物乳杆菌为目标益生菌,通过连续5天大剂量抗生素头孢地尼处理昆明小鼠建立肠道菌群失调动物模型,运用现代分子生态学技术PCR-DGGE结合传统培养法观察和分析了此目标菌株对肠道菌群失调的调整作用。并监测了植物乳杆菌作用过程中肠道菌群的变化情况。结果：(1)肠道菌群失调模型的制备：连续5天大剂量抗生素头孢地尼处理,且停用抗生素一周检测肠道细菌乳杆菌、双歧杆菌、肠杆菌、肠球菌及厌氧总菌数量均下降,与正常对照组相比,具有极显著性差异(P0.01),模型制备成功；(2)植物乳杆菌对肠道菌群失调的调节作用：在成功制备动物模型基础上,植物乳杆菌治疗组乳杆菌、肠杆菌、厌氧总菌、肠球菌有较明显的恢复,双歧杆菌虽也有恢复但增长幅度不及其他菌；DGGE图谱分析表明,植物乳杆菌组与正常对照组具有一定程度的相似性。植物乳杆菌组多样性指数与自然恢复组相比,具有明显差异；说明植物乳杆菌对抗生素诱导的肠道菌群失调具有一定的调节作用。(3)植物乳杆菌对肠道菌群的调节过程：随着植物乳杆菌饲喂时间的延长,小鼠肠道菌群丰富度呈现逐渐增加的演替过程,至饲喂第四天肠道菌群多样性与正常小鼠基本一致。DGGE图谱测序结果表明植物乳杆菌调节小鼠肠道菌群失调的作用主要表现在两个方面：选择性地增加有益菌如 Bacteroides stercoris、Bacteroides uniformis strain等的量；抑制致病菌如(Clostridium clostridioforme、Pseudomonas stutzeri等的生长。(4) PCR-DGGE法在分析复杂的肠道菌群影响方面,是一种快速、有效的分子生物学方法,尤其在监测微生态区系的菌群动态变化方面具有独特的优势。
【关键词】：肠道微生态 头孢地尼 菌群失调 植物乳杆菌 变性梯度凝胶电泳
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R371
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 1 前言9-19
• 1.1 肠道菌群9-12
• 1.1.1 肠道菌群的构成9-10
• 1.1.2 肠道菌群的分类10
• 1.1.3 肠道菌群的生理作用10-11
• 1.1.4 肠道菌群的微生态失调11-12
• 1.2 益生菌12-13
• 1.2.1 益生菌的概念12
• 1.2.2 益生菌的作用12-13
• 1.3 分子生态学方法在肠道微生物群落分析中的应用13-16
• 1.3.1 传统的微生物学方法13
• 1.3.2 生物标记法13-14
• 1.3.3 生理学的方法——BIOLOG ECO微孔板14
• 1.3.4 基于PCR的微生物分子生态学技术14-16
• 1.4 肠道微生态的分子生态学技术研究进展16-18
• 1.5 研究的目的和意义18-19
• 2 材料与方法19-26
• 2.1 试验材料19-20
• 2.1.1 实验菌株19
• 2.1.2 抗生素19
• 2.1.3 实验动物19
• 2.1.4 主要试剂19
• 2.1.5 仪器设备19-20
• 2.2 实验方法20-26
• 2.2.1 实验小鼠分组与抗生素诱导的肠道菌群失调动物模型的建立20
• 2.2.2 植物乳杆菌对抗生素诱导小鼠肠道菌群失调的调节作用20
• 2.2.3 粪便样本的采集及检测指标20-21
• 2.2.4 肠道细菌微生物区系的PCR-DGGE分析21-26
• 3 实验结果与分析26-41
• 3.1 小鼠肠道菌群失调动物模型的建立26
• 3.2 植物乳杆菌对抗生素诱导的小鼠肠道菌群失调的调整作用26-41
• 3.2.1 各组小鼠体重26-27
• 3.2.2 各组小鼠日摄食量的变化27
• 3.2.3 小鼠粪便活菌计数27-28
• 3.2.4 小鼠粪便细菌微生物区系的PCR-DGGE分析28-41
• 4 讨论41-48
• 4.1 抗生素头孢地尼制备肠道菌群失调动物模型41-42
• 4.2 粪便DNA的提取42-43
• 4.3 益生菌对肠道菌群失调的调节作用43-46
• 4.4 DGGE谱带亮度上的差异46
• 4.5 16S RDNA基因和DGGE技术应用46-48
• 5 结论48-49
• 5.1 肠道菌群失调动物模型的制备48
• 5.2 植物乳杆菌对肠道菌群失调的调节作用48
• 5.3 植物乳杆菌对肠道菌群紊乱调节作用过程的监测48
• 5.4 现代分子生态学技术PCR-DGGE技术48-49
• 6 展望49-50
• 7 参考文献50-56
• 8 攻读硕士期间发表论文情况56-57
• 9 致谢57-58
• 附录58-60

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1 张e

本文编号：328576