自噬抑制对内皮祖细胞影响的实验研究

发布时间：2021-07-20 17:29

　　目的:探讨抑制内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）的自噬对于细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为EPCs治疗深静脉血栓提供一种新的思路。方法:1. Ficoll密度梯度离心法获取Wistar大鼠的骨髓单个核细胞（bone marrow-derived mononuclear cells,BMMNCs）,内皮祖细胞培养基（EGM-2MV）体外诱导分化为EPCs并进行鉴定。2.实验分五组,对照组及3-甲基腺嘌呤（3-methlyadenine 3-MA）四个浓度组,分别为1.25mmol/l、2.5mmol/l、5mmol/l、10mmol/l,采用常规四氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium MTT）比色法测定各浓度3-MA及对照组对EPCs增殖的作用。3.流式细胞仪检测各浓度3-MA对EPCs凋亡率的影响及EPCs周期检测。4.应用单丹（磺）酰戊二胺（Monodansylcadaverine MDC）荧光染色和透射电镜观察3-MA给药后EPCs自噬的发生及细胞超微结构的变化。5.Western blot检测3-MA给药... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

刚分离的BMMNC呈圆形，较小，大小不一

浮状态（图1）。细胞很快开始贴壁，48h后部分细胞逐渐变大、伸展，未贴壁的细胞逐渐缩小、死亡。4-8d细胞生长迅速，处于对数生长期，形态多呈梭形、三角形、纺锤形及不规则形（图2-3）。第10-12 天，细胞长满培养瓶底，呈典型铺路鹅卵石样外观（图4）。此时的细胞数可达到（4.5±0.5）×105，能够满足实验的需求。

8图 3 第 7 天的 EPCs，细胞梭形，三角形，椭圆形及 图 4 第 12 天的 EPCs，细胞长满培养瓶，细胞间相互不规则外观（×200） 连接，呈典型鹅卵石样外观（×200）2．EPCs免疫组化及免疫荧光鉴定选取目前比较公认的特异性标志VEGFR-2，CD34和CD133的表达情况进行免疫组化及免疫荧光鉴定，细胞表面标志VEGFR-2，CD34免疫组化检测（图5，6），阳性细胞胞浆呈棕黄色，细胞表面标志CD133免疫荧光鉴定（图7），荧光显微镜下细胞呈蓝绿色荧光。

【参考文献】：
期刊论文
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[2]自噬在细胞生存和肿瘤发生中的作用[J]. 颜次慧,梁中琴,顾振纶,秦正红.  中国药理学通报. 2005(03)
[3]凋亡相关蛋白Survivin及Caspase3在肾细胞癌中的表达及其与凋亡的关系[J]. 郑涛,张旭,彭健,黄皓,马鑫,李宏召.  华中科技大学学报(医学版). 2005(01)
[4]MTT比色法测定细胞毒效应的应用进展[J]. 张建华,田志刚.  国外医学(肿瘤学分册). 1997(04)



本文编号：3293265