利用CRISPR/Cas9构建甲基丙二酸血症cblC型W203X突变小鼠模型

发布时间：2021-07-23 06:31

　　目的利用CRISPR/Cas9技术构建与人甲基丙二酸血症cblC型W203X突变型一致的小鼠模型。方法通过BLAST比对人和小鼠cblC基因和蛋白序列的保守性,应用CRISPR/Cas9技术进行小鼠受精卵显微注射,获得杂合子F1代小鼠,F1代小鼠通过杂交获得W203X纯合突变型小鼠,并对纯合突变型、同窝杂合型及野生型3种类型小鼠进行血代谢产物丙酰肉碱检测。结果人和小鼠甲基丙二酸血症cblC型的致病基因MMACHC的核苷酸和氨基酸序列高度保守。通过CRISPR/Cas9技术成功获得W203X纯合突变型小鼠,该小鼠模型在生后24 h丙酰肉碱明显升高（P<0.001）。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建了与人甲基丙二酸血症cblC型W203X突变型一致的小鼠模型。[中国当代儿科杂志,2019,21（8）:824-829] 

【文章来源】：中国当代儿科杂志. 2019,21(08)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂与仪器
    1.2 CRISPR/Cas9系统的设计
    1.3 sgRNA的体外合成及活性检测
    1.4 同源重组模板（Donor质粒）的构建及体外转录
    1.5 小鼠受精卵显微注射
    1.6 小鼠出生及基因型鉴定
    1.7 稳定遗传的点突变小鼠品系的建立
    1.8 纯合子小鼠血代谢产物检测
    1.9 统计学分析
2 结果
    2.1 MMACHC基因在人和小鼠中保守性分析
    2.2 sgRNA靶点的设计原则及其选择
    2.3 CRISPR/Cas9介导的基因敲入获得W203X纯合突变小鼠
    2.4 W203X纯合突变小鼠血代谢产物分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]中国1003例甲基丙二酸血症的复杂临床表型、基因型及防治情况分析[J]. 刘怡,刘玉鹏,张尧,宋金青,郑宏,董慧,马艳艳,吴桐菲,王峤,李溪远,丁圆,李东晓,金颖,李梦秋,王朝霞,袁云,李海霞,秦炯,杨艳玲.  中华儿科杂志. 2018 (06)
[2]甲基丙二酸血症患者143例资料分析[J]. 黄倬,韩连书,叶军,邱文娟,张惠文,高晓岚,王瑜,季文君,李筱燕,顾学范.  中华内分泌代谢杂志. 2014 (06)
[3]早发型甲基丙二酸尿症160例新生儿期异常表现[J]. 刘玉鹏,马艳艳,吴桐菲,王峤,李溪远,丁圆,宋金青,黄昱,杨艳玲.  中华儿科杂志. 2012 (06)
[4]甲基丙二酸尿症cblC型合并同型半胱氨酸血症的临床与实验室研究进展[J]. 刘玉鹏,杨艳玲.  中华儿科杂志. 2013 (04)
[5]甲基丙二酸血症伴同型半胱氨酸血症患儿临床及基因突变分析[J]. 韩连书,王斐,胡宇慧,叶军,邱文娟,张雅芬,高晓岚,王瑜,金晶,顾学范.  中华内分泌代谢杂志. 2009 (04)



本文编号：3298798