表达pri-mir-302/367基因的慢病毒颗粒的制备及其感染人脐血单个核细胞的实验究

发布时间：2021-07-23 05:31

　　目的制备可诱导表达pri-mir-302/367基因的重组慢病毒颗粒，并在HeLa细胞中研究该基因对多能性基因的调控作用；通过病毒感染人脐血单个核细胞（human cordblood mononuclear cells，hCBMNC），旨在探究该基因对hCBMNC的重编程作用。方法（1）以正常人基因组DNA为模板，PCR扩增目的基因，将目的基因连接入酶切线性化的pLV-TRE质粒，构建pLV-TRE-302慢病毒重组体，酶切及测序予以鉴定。（2）通过重组质粒和辅助质粒共转染293T细胞对慢病毒进行包装及滴度测定；用病毒转染HeLa细胞，强力霉素（doxycline, DOX）诱导后，通过real time-PCR测定miR-302/367家族基因及其下游调节基因Oct4、Sox2和Nanog的表达情况。（3）用病毒感染hCBMNC，经DOX诱导后，在胚胎干细胞培养基培养条件下观察其形态学变化，并用real time-PCR分别检测多能性基因Oct4、Nanog、Sox2、Klf4和c-Myc的表达情况。结果（1）成功制备pri-mir-302/367重组慢病毒颗粒，基因测序结果与目标序... 

【文章来源】：宁夏医科大学宁夏回族自治区

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

三种体细胞重编程的方法

图 2. miR-302/367 的基因结构Fig 2. Gene structure of the miR-302-367 cluster[26].随着 iPSCs 技术的发展，有学者发现 miR-302/367 与体细胞重编程有密切的关系[28]如 Ying 和他的同事们建立了基于 Pol-II 的内含子 miRNA 表达系统，借助逆转录病毒将

在293T细胞检测重组慢病毒


本文编号：3298699