MiR-696在PGC-1α介导的ob/ob小鼠肝糖异生中的作用研究

发布时间：2021-07-27 03:10

　　研究背景:MicroRNA （miRNAs）是一类内源性长约19-23个核苷酸的小分子非编码RNA,通常在转录后水平和翻译水平调控基因的表达。PGC-1α在肝脏中的主要作用是促进肝糖异生及调节脂肪酸氧化。本文主要通过体内外实验研究了miR-696对PGC-1α调控的分子机制及其在肝脏糖异生中的作用。研究方法：（1）采用western blotting和qRT-PCR技术分别检测ob/ob小鼠和C57BL/6小鼠肝脏组织中PGC-1α蛋白及miR-696的表达水平；（2）构建pre-miR-696-LV, pre-NC-LV, anti-miR-696-LV, anti-NC-LV慢病毒载体,分别感染小鼠原代肝细胞72h后,在荧光显微镜下观察各组细胞的感染情况,同时qRT-PCR和western blotting分别检测各组小鼠原代肝细胞中miR-696及PGC-1α蛋白的表达水平；（3）构建psiCHECK-2-PGC-1α3’UTR质粒,通过luciferase检测研究aiR-696对PGC-1α是否有直接的靶向作用；（4）选择肝脏糖异生关键酶PEPCK为指标,进一步研究miR-69... 

【文章来源】：南京大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

}MiCFO的作用机制

活MAPK的激酶(MEK)。MEK再进一步通过MAPK激活核糖体S6激酶，两者共同作用进一步激活下游转录因子，如图1.4所示。胰岛素主要通过上述两种信号传导途径的一系列级联反应，发挥着强大的生物学效应。I Im i I §2?飞 &L ,Z <-EaX->1' )r ^ ； 丁k?9(供:j? aifl ttSd?. MW衣 Avw fjfi ffy- Cii,l ?仁图1.4胰岛素信号传导示意图2.3.3 IR的分子水平机制IR的发生机制相当复杂，主要与胰岛素受体前、受体及受体后的异常有关。由于胰岛素需要与受体结合后才能通过一系列信号级联反应发挥其生物学效应，因此受体的数量、胰岛素与受体的亲和性，特别是受体酪氨酸激酶的活性状态都相当重要[25]。目前研究认为，编码受体的基因突变引起的信号传导网络，尤其是受体自动磷酸化功能的障碍是IR的主要分子水平机制[26]。(1)胰岛素受体前缺陷胰岛素受体前缺陷主要包括：胰岛素抗体形成（多为注射动物胰岛素所致)；胰岛素基因突变引起胰岛素分子结构异常；胰岛素降解加速；胰岛素措抗激素的作用致胰岛素抵抗等。内源性或外源性途径产生的胰岛素抗体，可干扰胰岛素与其受体的正常结合从而造成胰岛素抵抗。例如，注射动物源胰岛素所产生的胰岛素抗体可能导致患者发生胰岛素抵抗等症状I27]。胰岛素的基因突变可能产生分子结构异常的胰岛素

pHBLV-CMVIE-IRES-ZsGreen 图谱如图 2.1 所示，其中 EcoRI 和 BamHI 为插入位点。然后用包装好的慢病毒感染小鼠原代肝细胞。具体步骤为：将小鼠原代肝细胞铺盘于6孔板，每孔板约5X105个细胞，观察细胞密度达30%满后在各组细胞中分别加入不同的慢病毒载体，M01=40，24小时后换液。72小时后在突光显微镜下观察小鼠原代肝细胞中ZsGreen绿色突光蛋白的表达情况即反映慢病毒的感染情况。


本文编号：3304948