H1/H3亚型流感病毒多表位DNA疫苗发酵、纯化及免疫评价

发布时间：2021-07-28 01:12

　　流感病毒（Influenza Virus）能够引起人和动物呼吸道传染病。世界卫生组织首先以病毒蛋白为依据，将其分为甲、乙、丙三种类型，再根据病毒表面结构蛋白血凝素（Hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶（Neuraminidase，NA）的不同分为种类繁多的血清亚型。迄今已经发现17种HA亚型，NA亚型有10种。H1，H3亚型主要引起人、猪、禽的流行性感冒，并且每年因疾病流行给人类带来巨大的经济损失。流感病毒抗原表位变异快，血清亚型众多，新型疫苗制备困难加大。将流感病毒表面的亚型优势表位被筛选组合，构建可预防多种亚型流感的多表位核酸疫苗。目的在于抵御传播快、变异快，血清型多的流感流行。将已构建的多表位核酸疫苗质粒（pVAX1-H3-EHA-H1HA1new，pVAX1-H3-H1HAnew，pVAX1-EHA），进行了发酵条件摸索及工艺建立。结果表明，两种多表位核酸疫苗质粒最佳发酵条件为：培养体系20L，接种子液2L，37℃培养9h，最佳溶氧量是30%，最佳PH值为7.25。培养过程中流速补加葡萄糖可显著延长大肠杆菌生长的对数生长期，获得较高菌量，增加量为0.3Kg。将菌体应用... 

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发酵过程中不同时间提取质粒pVAX-H3HA-EHA-H1HA1new电泳图

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13图1.2 发酵过程中不同时间提取质粒pVAX-H3HA-EHA-H1HA1 new电泳图Fig. 1.2 The electrophoresis of recombinant plasmid pVAX-H3HA-EHA-H1HA1 newobtained at different time during formation同时间菌体密度小提质粒电泳图图 1.1 不同发酵时间宿主菌菌体密度Figure 1.1 the density of host bacteria at different fermentation time

位细胞裂解物干重中 RNA、蛋白质、粒 DNA 只占＜3%[84]。质粒 DNA 的含的细胞系、所借助的克隆载体的类型、了在提取和纯化质粒过程中选择技术手大量流失考虑在内。 要比质粒 DNA 大的多，质粒 DNA 只来了很大的困难。所以十分有必要探索高纯化效率而操作手段又不至过于复杂 2.2 色谱柱纯化过程中核酸成分形成的洗脱k of the nucleic acid component is formed in thcolumn chromatography RNA 的洗脱峰; 2. 目的质粒 DNA 的洗脱峰0 50 100 150 ml体积/Volume


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