Pes1通过PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对胆汁淤积性肝病小鼠的作用

发布时间：2021-08-02 03:04

　　目的:胆汁淤积性肝病在人群及临床中非常常见,它可由各种原因引起的胆汁生成、分泌和排泄障碍,导致胆汁在肝内淤积,而引起的肝细胞、肝内外胆管一系列器质性损害、代谢失调和功能性异常的肝胆系统疾病。此状态若持续发展将成为肝硬化、肝癌导致死亡。文献报道Pes1在其基序中含有保守的BRCA1 C末端（BRCT）结构域,考虑到此结构域作为响应DNA损伤反应的整合信号模块,Pes1也可能参与DNA损伤和修复,本课题探讨Pes1以及PI3K/AKT/GSK-3β信号通路中的蛋白在胆汁淤积性肝病小鼠中的表达及其对疾病的影响。方法:（1）为探讨胆汁淤积性肝病对小鼠的影响,分别使用0.1%DDC饲料和普通饲料饲喂小鼠4周,比较胆汁淤积性小鼠及正常小鼠体质量的差异。（2）为了解探讨胆汁淤积对小鼠肝脏的影响,取小鼠肝脏用4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,切片,做常规病理HE染色,在光学显微镜下观察胆汁淤积性肝病小鼠与正常小鼠组织病理变化。（3）为了解探讨胆汁淤积对小鼠血清的影响,取小鼠血清,按照生化试剂测试盒说明书操作检测胆汁淤积性肝病小鼠与正常小鼠血清中总胆汁酸（TBA）、总胆红素（TBIL）、碱性磷酸酶（AKP）、... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

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PES1及其相关分子在肝组织中表达的实验技术路线图

安徽医科大学硕士学位论文14图2.PES1及相关分子在小鼠肝细胞AML12中表达及其作用的实验技术路线图Figure2.ExperimentaltechnologyroadmapofPES1andrelatedmoleculesexpressioninmouselivercellsAML122.2.2小鼠血清生化指标检测取小鼠血清，按照生化试剂测试盒说明书操作检测血清中总胆汁酸（TBA）、总胆红素（TBIL）、碱性磷酸酶（AKP）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）的水平。具体步骤如下：总胆汁酸（TBA）检测：（1）分别设标准孔和测定孔，标准孔加入标准品3μl，测定孔加入血清样品3μl（2）标准孔和测定孔分别加入试剂一（甘氨酸缓冲液+稳定剂）200μl（3）标准孔和测定孔分别加入试剂二（胆汁酸酶+NADH）50μl（4）混匀，37℃孵育1.5min后，用酶标仪测定405nm波长，读取0-2min吸光度，计算△A/min，TBA含量（μmol/L）=（△A测定/△A标准）*标准品浓度（μmol/L）。标准品（甘氨胆酸钠）：40μmol/L

3.1.1 胆汁淤积性肝病对小鼠活动以及体重的影响我们使用普通饲料和 0.1 ％DDC 饲料饲喂小鼠，在喂养的 4 周期间内，DDC模型小鼠随着喂食时间增加出现呆滞少动，皮肤黄染；对照组小鼠情况基本正常 4周之后，在实验麻醉之前先称量每只小鼠体重。开始喂养时正常对照组小鼠体质量为（24.32±0.19）g 与 DDC 组小鼠体质量（24.19±0.46）基本一致，无明显差异。如图所示，喂养 4 周后 DDC 小鼠体质量为（18.32±1.13）g，与对照组正常 C57BL/6小鼠（25.30±0.94）g 比较，DDC 模型小鼠体重明显减轻，差异有统计学意义（t=4.83，P＜0.05，图 1）。


本文编号：3316759