脾气虚证大鼠股四头肌线粒体自噬水平及AMPK/ULK1途径变化的研究

发布时间：2021-08-01 22:15

　　目的观察脾气虚证大鼠股四头肌线粒体自噬水平及腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/UNC-51-类似自噬激活激酶1（ULK1）途径的变化,从线粒体方面研究"脾气虚四肢不用"的机制。方法运用饮食失节+劳倦法复制脾气虚证大鼠模型,随机分为对照组和脾气虚模型组（模型组）,造模成功后取股四头肌,比色法检测三磷酸腺苷（ATP）含量;JC-1法检测线粒体膜电位（MMP）;免疫荧光及印迹法（Western blot）法检测微管相关蛋白1轻链3-B （LC3 B）、选择性自噬接头蛋白（p62）表达水平及与线粒体共定位的量;Western blot法检测AMPKα及ULK1蛋白表达。结果与对照组比较,模型组股四头肌ATP、MMP下降（P<0.05,P<0.01）;LC3B-II蛋白表达及与线粒体共定位增加（均P<0.01）、p62蛋白表达及与线粒体共定位减少（均P<0.01）;p-AMPKα/AMPKα及p-ULK1/ULK1比值升高（均P<0.01）。结论 "脾气虚四肢不用"可能与AMPK/ULK1途径激活所致的线粒体自噬水平提高不足有关。 

【文章来源】：北京中医药大学学报. 2019,42(09)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

A:Controlgroup;B:Modelgroup．Scale=10μm．图12组大鼠股四头肌LC3B与线粒体共定位(×100)Fig．1Co-localizationofLC3Bandmitochondriainquadricepsfemorisinratsoftwogroups(×100)A:对照组;B:

A:对照组;B:模型组。标尺=10μm。A:Controlgroup;B:Modelgroup．Scale=10μm．图12组大鼠股四头肌LC3B与线粒体共定位(×100)Fig．1Co-localizationofLC3Bandmitochondriainquadricepsfemorisinratsoftwogroups(×100)A:对照组;B:模型组。标尺=10μm。A:Controlgroup;B:Modelgroup．Scale=10μm．图22组大鼠股四头肌p62与线粒体共定位(×100)Fig．2Co-localizationofp62andmitochondriainquadricepsfemorisinratsoftwogroups(×100)表22组大鼠股四头肌LC3B、p62与线粒体共定位的量(x珋±s;n=3)Table2Co-localizationofLC3B/p62andmitochondriaofquadricepsfemorisinratsoftwogroups(x珋±s;n=3)组别GroupsLC3Bp62对照组Controlgroup1．0001．000模型组Modelgroup1．926±0．4890．512±0．166t4．3173．707P0．0020．0093．32组大鼠股四头肌LC3B-II与p62蛋白表达与对照组比较，模型组股四头肌LC3B-II蛋白表达升高(P＜0．01)，p62蛋白表达下降(P＜0．01)，见图3、表3。表32组大鼠股四头肌LC3B-II、p62相对表达量(x珋±s;n=4)Table3ExpressionofLC3B-IIandp62proteininquadricepsfemorisinratsoftwogroups(x珋±s;n=4)组别GroupsLC3B-IIp62对照组Controlgroup0．438±0．1151．260±0．149模型组Modelgroup0．939±0．1920．657±0．155t12．9247．173P0．0010．002第9期刘文俊等脾气虚证大鼠股四头肌线粒体自噬水平及AMPK/ULK1途径变化的研究367

1、2:对照组;3、4:模型组。1，2:Controlgroup;3，4:Modelgroup．图32大鼠股四头肌LC3B-II与p62蛋白印迹Fig．3BlottingofLC3B-IIandp62proteininquadricepsfemorisinquadricepsfemorisinratsoftwogroups3．42大鼠股四头肌AMPKα和p-AMPKα及ULK1和p-ULK1蛋白表达与对照组比较，模型组股四头肌p-AMPKα/AMPKα及p-ULK1/ULK1比值升高(均P＜0．01)。见图4、表4。1、2:对照组;3、4:模型组。1，2:Controlgroup;3，4:Modelgroup．图42大鼠股四头肌p-AMPKα/AMPKα及p-ULK1/ULK1蛋白印迹Fig．4Blottingofp-AMPKα/AMPKαandp-ULK1/ULK1proteininquadricepsfemorisinratsoftwogroups表42组大鼠股四头肌p-AMPKα/AMPKα及p-ULK1/ULK1相对表达量(x珋±s;n=4)Table4Expressionofp-AMPKα/AMPKαandp-ULK1/ULK1proteininquadricepsfemorisinratsoftwogroups(x珋±s;n=4)组别Groupsp-AMPKαAMPKαp-ULK1ULK1对照组Controlgroup0．545±0．1511．079±0．0960．689±0．1151．260±0．149模型组Modelgroup0．690±0．1010．903±0．1690．916±0．1921．157±0．155t4．3410．97810．2150．765P0．0170．1930．0010．6754讨论线粒体产能是细胞执行生物学功能的物质基础，也是“脾主肌肉”的重要环节，因此，维护其结构和功能稳定对于细胞生存至关重要。已有研究显示，脾气虚证大鼠骨骼肌线粒体功能异常，为此我们检测了ATP含量和MMP水平。实验结果显示，脾气虚大鼠股四头肌ATP和MMP均明显下降，提示线粒体功能异常，说明脾气虚时股四头肌线粒体

【参考文献】：
期刊论文
[1]电针“足三里”对脾虚大鼠骨骼肌线粒体自噬相关蛋白表达的影响[J]. 董佳梓,张妤,魏云涛,许环宇,刘路,邓婷月,张立德.  中国针灸. 2018(07)
[2]脾气虚证模型大鼠神疲乏力的客观化评价[J]. 刘旭东,刘文俊,孙大宇,崔勇,冯晓帆,单德红,王德山.  中华中医药杂志. 2015(03)



本文编号：3316337