降钙素基因相关肽对骨质疏松大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响

发布时间：2017-04-29 01:07

  本文关键词：降钙素基因相关肽对骨质疏松大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究体外降钙素相关基因肽(Calcitonin gene-related peptide, CGRP)对骨质疏松性大鼠的骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化能力的影响；并初步探明其促进骨质疏松性骨折愈合的细胞／分子作用机制。方法：取3月龄SD大鼠,行腹部切口双侧卵巢切除术,术后所有动物常规喂养12周。术前与术后行骨密度检测,确定建模成功后,处死大鼠。采用全血贴壁法分离骨髓基质干细胞,并用流式细胞仪鉴定BMSCs。将细胞扩增传代至第三代,根据分组,培养基中加入含不同浓度(10-7mol/L～10-10mol/L)的CGRP。细胞的增殖能力用MTT法检测;碱性磷酸酶染色及茜素红染色法观察CGRP对骨质疏松性大鼠BMSCs的成骨分化及细胞外基质矿化能力的影响。最后采用RT-PCR方法检测碱性磷酸酶(ALP)、I型胶原(COLL-1)、 BMP-2、RunX2、骨粘连蛋白(Osteonectin)等成骨相关细胞基因mRNA的表达。结果：成功分离培养出骨质疏松性大鼠的骨髓基质干细胞,MTT法测定CGRP组各浓度均较对照组增加,且呈剂量依赖关系,差异有显著性(P0.05)；碱性磷酸酶染色及钙结节染色结果显示,各CGRP组染色均呈阳性,而对照组无显色。基因检测结果提示,各CGRP组的基因表达较对照组升高(P0.05)。结论：适当浓度(10-7mol/L～10-10mol/L)的CGRP可以促进骨质疏松性大鼠体外培养的BMSCs增殖,呈浓度依赖性,并可以提高其成骨分化的能力。为CGRP在治疗骨质疏松性骨折的骨修复中的作用提供细胞/分子学依据。
【关键词】：降钙素基因相关肽(CGRP) 骨质疏松 骨髓基质干细胞 成骨分化
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 前言6-7
• 1. 材料和方法7-14
• (1) 材料7-8
• (2) 分组与造模8-9
• (3) 骨质疏松性SD大鼠BMSCs分离培养及鉴定9-10
• (4) 骨髓基质干细胞增殖情况检测10
• (5) 骨质疏松性骨髓基质干细胞向成骨细胞诱导分化情况检测10-13
• (6) 统计学处理13-14
• 2. 结果14-20
• (1) 细胞表型特征鉴定14-15
• (2) 细胞形态学观察(HE染色)15-16
• (3) CGRP对细胞增殖率的影响16-17
• (4) 碱性磷酸酶染色情况17-18
• (5) 钙结节染色情况18-19
• (6) CGRP对成骨细胞相关基因表达水平的影响19-20
• 3. 讨论20-25
• 4. 结论25
• 参考文献25-31
• 附录1 中英文缩略词表31-32
• 致谢32-33
• 综述33-44
• 参考文献41-44

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 郑林丰;谢应桂;许愿忠;;降钙素基因相关肽在神经系统损伤中的作用[J];创伤外科杂志;2006年06期

2 徐琳,谭颖徽,王建华,张纲;失神经支配兔下颌骨骨折愈合过程中CGRP对OPG/RANKL表达的影响[J];第三军医大学学报;2005年10期

3 韩娜;姜保国;王天兵;张培训;寇玉辉;张殿英;;降钙素基因相关肽对大鼠成骨细胞表达转录因子RUNX2的影响[J];北京大学学报(医学版);2011年05期

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本文编号：333897