新型受体相互作用蛋白激酶3突变体的激酶活性研究

发布时间：2021-08-14 23:50

　　目的·研究新型受体相互作用蛋白激酶3（receptor interacting protein kinase 3,RIPK3）突变体的激酶活性。方法·分别对RIPK3中的4个氨基酸（Q84WDF87）进行突变,并将这些突变体与混合谱系蛋白激酶样假激酶（mixed lineage kinase domain like pseudokinase,MLKL）共同转染到HEK293T细胞中。通过Western blotting检测新型RIPK3突变体S232位点自磷酸化的情况及其对MLKL S345位点磷酸化的影响;通过免疫共沉淀法观察RIPK3与MLKL之间的相互作用;采用非还原裂解法检测MLKL的寡聚化情况。结果·RIPK3ΔQ84、RIPK3ΔW85和RIPK3ΔD86的激酶活性显著降低,RIPK3Q84A/RIPK3Q84E、RIPK3W85Y和RIPK3D86A/RIPK3D86Y的激酶活性无明显改变;RIPK3W85A的自磷酸化减少,但不影响MLKL的磷酸化与寡聚化。结论·Q84、W85与D86是调节RIPK3激酶活性的关键氨基酸位点,RIPK3W85A的激酶活性减弱,但其对MLK... 

【文章来源】：上海交通大学学报(医学版). 2019,39(08)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
        1.2.1 质粒
        1.2.2 细胞培养和质粒转染
        1.2.3 Western blotting
        1.2.4 免疫共沉淀
        1.2.5 蛋白多聚化检测
2 结果
    2.1 RIPK3Δ的激酶活性降低
    2.2 RIPK3(ΔQ84、ΔW85、ΔD86、ΔF87)激酶活性的变化
    2.3 RIPK3(Q84A、W85A、D86A、F87A)激酶活性的变化
    2.4 RIPK3(Q84E、W85Y、D86N、F87Y)的激酶活性无改变
3 讨论



本文编号：3343413