宿主细胞对乙肝病毒复制的代谢应答研究

发布时间：2021-08-17 05:31

　　乙肝病毒（HBV）慢性感染仍然危害着人类的健康,全球大约有3.5亿慢性乙型肝炎患者。长期的HBV慢性感染可以导致脂肪肝和肝纤维化,最后发展为肝细胞肝癌。目前,HBV感染导致疾病的相关病理机制还需要进一步研究,现有的抗病毒药物并不能完全治愈HBV感染。代谢是生命活动中生物化学过程的总称,而病毒在细胞内复制必然伴随着代谢的变化。因此,宿主细胞对HBV复制的代谢应答研究能够从代谢水平提供病毒与宿主细胞之间的相互作用信息,为研究HBV致病机理和感染治疗提供新的思路。本论文以含有HBV基因组的稳定肝肿瘤细胞系为研究对象,以期建立和完善基于核磁共振（NMR）的细胞代谢组分析方法及具有统计意义的多变量代谢组学数据分析方法；采用代谢组学、蛋白质组学以及分子生物学相结合的方法,研究HBV复制影响细胞代谢组的变化规律,发现与HBV复制相关的代谢物以及所受影响的代谢途径；阐明HBV复制导致的宿主细胞脂肪酸组成变化；深入探讨HBV复制与宿主细胞代谢改变之间的关系。本论文建立了基于NMR的细胞代谢组分析所用样品的制备方法；提出了细胞提取物样品数据的细胞重量归一化方法,并给出了具体的操作流程；完善了培养基提取物数... 

【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院武汉物理与数学研究所)湖北省

【文章页数】：130 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 研究背景与内容
    1.2 代谢组学简介
        1.2.1 代谢组学的定义
        1.2.2 代谢组学的研究方法与特点
    1.3 核磁共振简介
        1.3.1 核磁共振的基本原理
        1.3.2 化学位移
        1.3.3 J耦合常数
        1.3.4 代谢组学研究中常用的核磁谱
        1.3.5 核磁谱中物质的归属
    1.4 代谢组学数据统计分析方法
        1.4.1 数据的归一化与标准化
        1.4.2 常用的多变量统计分析方法
        1.4.3 多变量统计分析模型的验证
        1.4.4 特征代谢物信息的提取
2 基于NMR的细胞样品代谢组学分析方法的建立
    2.1 细胞样品的制备方法
        2.1.1 材料与方法
        2.1.2 NMR样品的配制和检测
        2.1.3 结果与讨论
    2.2 细胞样品的数据归一化方法
        2.2.1 细胞提取物数据的归一化方法
        2.2.2 培养基提取物数据的归一化方法
    2.3 小结
3 实验材料与方法
    3.1 化学试剂
    3.2 细胞培养
    3.3 代谢组分析
        3.3.1 代谢物提取
        3.3.2 NMR样品配制和检测
        3.3.3 NMR谱图数据分析
        3.3.4 脂肪酸组成分析
    3.4 蛋白质组分析
        3.4.1 蛋白质亚细胞分离
        3.4.2 蛋白质消化和多肽分离
        3.4.3 质谱分析
        3.4.4 蛋白质的鉴定和定量
    3.5 实时荧光定量PCR分析
    3.6 细胞转染
    3.7 酶联免疫吸附实验(ELISA)
    3.8 HBV DNA复制水平检测
4 实验结果
    4.1 代谢物的归属
    4.2 宿主细胞对HBV复制的整体代谢应答
        4.2.1 HBV复制对细胞代谢轮廓的影响
        4.2.2 HBV复制对细胞蛋白质组的影响
    4.3 HBV复制对宿主细胞中心碳代谢的影响
    4.4 HBV复制与己糖胺生物合成途径之间的关系
    4.5 HBV复制改变了宿主细胞的脂肪酸组成
    4.6 HBV复制与磷脂酰胆碱生物合成途径之间的关系
    4.7 HBV复制改变宿主细胞的氨基酸代谢并诱导氧化应激
5 讨论
    5.1 宿主细胞的代谢改变与HBV复制和分泌之间的关系
    5.2 宿主细胞的代谢变化与肿瘤形成
    5.3 HBV诱导的代谢变化与脂肪肝和炎症
    5.4 HBV诱导的代谢改变对治疗的提示
    5.5 小结
6 总结与展望
    6.1 总结
    6.2 展望
参考文献
附录A
附录B
附录C
附录D
作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]代谢组学:一个迅速发展的新兴学科（英文）[J]. 唐惠儒,王玉兰.  生物化学与生物物理进展. 2006(05)



本文编号：3347158