毕赤酵母STE13基因敲除对GGH表达及其生物活性的影响

发布时间：2017-04-29 14:00

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【摘要】：目的:重组毕赤酵母GS115/pPIC9K-GGH表达的人胰高血糖素样肽-1-人血清白蛋白融合蛋白[(GLP-1 A2G)2-HSA,GGH]的细胞活性测评结果显示生物活性较低,这可能与其表达过程中蛋白降解有一定关联。通过对毕赤酵母GS115 STE13基因的敲除,获得一株完整表达蛋白GGH的毕赤酵母宿主,并进一步提高其表达产物GGH的生物活性。方法:采用基于PCR技术介导的Cre-Loxp系统重组技术成功敲除宿主菌GS115的STE13基因,得到一株STE13缺陷型菌株GS115/D13,并通过细胞活性测评系统检测GS115/D13表达产物GGH的生物活性。结果:通过对STE13基因缺陷型菌株GS115/D13与出发菌株GS115/W发酵表达对比,显示GS115/D13菌株表达融合蛋白GGH生物活性有明显提升,且表达量提高了25.8%,两菌株生长无明显差异。结论:STE13基因的敲除成功缓解了GGH表达过程中的降解问题,并相对出发菌株GS115/W大幅度提高了蛋白生物活性。
【作者单位】： 江南大学药学院制药工程实验室;
【关键词】： 毕赤酵母 GLP- STE 生物活性
【基金】：国家自然科学基金(31000016) 江苏省科技支撑计划(BE2009629)
【分类号】：Q78
【正文快照】： 胰高糖素样多肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)是由肠道L细胞合成和分泌的30肽,不仅具有保护胰岛β细胞并抑制其凋亡、促进胰岛素合成和分泌的作用,还可作用于胰岛α细胞,强烈抑制胰高血糖素的释放,此外还可以作用于胰岛δ细胞,促进生长抑素的分泌,而后者又可作为旁分泌

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