柚皮苷对D-半乳糖诱导骨髓间充质干细胞衰老的保护作用
发布时间：2017-04-29 13:07
本文关键词：柚皮苷对D-半乳糖诱导骨髓间充质干细胞衰老的保护作用，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的本研究旨在从细胞水平研究柚皮苷(Naringin)对D-半乳糖诱导的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)衰老的保护机制，探讨P16，P21，，P53，tgfb1mRNA衰老相关基因在柚皮苷抗衰老中的重要作用，为今后柚皮苷作为延缓衰老治疗提供理论和实验依据。 方法（1）通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠BMSCs，通过形态学观察，绘制其生长曲线，分别向成骨、成脂方向诱导分化。（2）建立衰老模型：取48163264g"L浓度的D-半乳糖分别作用于第3代BMSCs，用MTT法检测细胞存活率，β-半乳糖苷酶染色观察细胞衰老染色率。结合MTT实验及β-半乳糖苷酶染色法，确定以16g"L的D-半乳糖处理第3代BMSCs，培养至第6代，即为D-半乳糖诱导的大鼠MSCs衰老模型。（3）将BMSCs为对照组、16g"L D-半乳糖诱导的BMSCs为衰老组，衰老组分别加入10㧟7、10㧟6、10㧟5、10㧟4、10㧟3、10㧟2mmol／L浓度柚皮苷作为保护组。分别用MTT法检测各干预组细胞增殖活力，β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老程度,总SOD检测试剂盒检测各组总SOD活性。用RT-PCR法检测各组细胞中衰老相关基因P16，P21，P53，tgfb1mRNA的表达水平。 结果（1）大鼠BMSCs生长以梭形细胞为主，细胞生长良好，传代后可连续稳定传代10代以上。测其生长曲线显示大鼠BMSCs符合正常细胞生长特征且生长较旺盛。对其分别进行成脂、成骨诱导后，油红O染色、碱性磷酸酶染色和茜素红染色均呈阳性。（2）48163264g"L的D-半乳糖处理年轻BMSCs后，与对照组相比较各组细胞存活率呈现不同程度下降(P0.05)。β-半乳糖苷酶染色法下48163264g"L浓度的D-半乳糖处理后细胞染色率均高于对照组(P0.05)。（3）衰老组分别加入10㧟7、10㧟6、10㧟5、10㧟4、10㧟3、10㧟2mmol／L浓度的柚皮苷保护后，柚皮苷保护组细胞存活率均高于衰老组(P0.05)。各浓度柚皮苷保护组β-半乳糖苷酶染色比衰老组均有所降低，差异均有统计学意义(P0.05)。各浓度柚皮苷保护组总SOD活性高于衰老组(P0.05)。10㧟7、10㧟6、10㧟5、10㧟4mmol／L浓度的柚皮苷能明显下调p16的表达(P0.05)，10㧟7、10㧟6、10㧟5、10㧟4、10㧟3mmol／L浓度的柚皮苷能明显下调p21的表达(P0.05)，各浓度的柚皮苷均能明显下调P53、tgf β1的表达(P0.05)。 结论柚皮苷可以减缓BMSCs衰老进程，其机制可能与抑制P16，P21，P53，tgf β1mRNA的表达有关。
【关键词】：BMSCs 衰老机制 保护作用
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：
- 缩略词表4-5
- 摘要5-7
- ABSTRACT7-10
- 前言10-12
- 实验材料12-14
- 实验方法14-17
- 试验步骤17-22
- 实验结果22-34
- 讨论34-39
- 结论39-40
- 参考文献40-43
- 文献综述43-59
- 参考文献55-59
- 攻读学位期间发表的学术论文目录59-60
- 致谢60
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 翟远坤;牛银波;潘亚磊;李晨睿;武祥龙;梅其炳;;柚皮苷对体外培养乳鼠颅骨成骨细胞增殖和分化成熟的影响[J];中国中药杂志;2013年01期
2 阮清伟;俞卓伟;保志军;马永兴;;免疫基因多态性与衰老和增龄相关疾病关系[J];遗传;2013年07期
本文关键词：柚皮苷对D-半乳糖诱导骨髓间充质干细胞衰老的保护作用，由笔耕文化传播整理发布。
本文编号：334908
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