肥大细胞活化剂compound 48/80联合乙肝疫苗对小鼠免疫功能的影响
发布时间：2021-08-21 07:12
目的初步探讨肥大细胞活化剂compound 48/80（C48/80）联合乙肝疫苗对实验小鼠抗体产生、淋巴细胞增殖的影响,寻找能够增强机体免疫应答能力的佐剂。方法 Balb/c小鼠经肩背部皮下注射C48/80,甲苯胺蓝法检测肥大细胞活化状态,流式细胞术检测肩上和腋窝局部引流淋巴结（draining lymph nodes,DLN）细胞悬液中树突状细胞（dendritic cell,DC）的数量;采用3种剂量C48/80联合乙肝疫苗免疫小鼠,ELISA法检测不同时间点血清乙肝表面抗体（抗-HBs）的含量,CCK-8试剂检测DLN淋巴细胞增殖活性。结果皮下注射C48/80可诱导小鼠局部皮肤肥大细胞活化,24 h脱颗粒肥大细胞数占局部肥大细胞总数比例为82%±5.2%;C48/80处理后DLN细胞总数和DC数量较对照组明显增多。C48/80联合乙肝疫苗免疫小鼠后3周和4周时血清中抗-HBs含量较单纯乙肝疫苗免疫组明显升高;C48/80处理组小鼠特异性淋巴细胞增殖能力较单纯乙肝疫苗免疫组明显增强。结论肥大细胞活化剂C48/80能够在较早时间点增强小鼠对乙肝疫苗的免疫应答,其机制可能与C48/8...
【文章来源】：免疫学杂志. 2015,31(08)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
NS（a）和Compound48/80（b）皮下注射后24h局部皮肤肥大细胞甲苯胺蓝染色(400×)
唬?嘀植≡?宄煞荨⒉?体片段和小分子肥大细胞活化剂等可活化肥大细胞，图1NS（a）和Compound48/80（b）皮下注射后24h局部皮肤肥大细胞甲苯胺蓝染色(400×)Fig1Toluidineblue-stainedmastcellsat24hfollowingsubcutaneousinjectionofnormalsaline(a)orCompound48/80(b)(400×).**P<0.01,***P<0.001.RepresentativeimagesofFACSanalysisforDLNCD11c+cellsinNStreated(a)andC48/80treated(b)micewereshown,andthetotalcell(c)andCD11c+cell(d)numberincontrolandC48/80treatedsidewerestatisticallyanalyzed.图2NS或C48/80处理肩背部皮肤后24hDLN中细胞总数、DC细胞数检测Fig2ThenumberoftotalcellsandCD11c+cellsindraininglymphnodes24hafterNSorC48/80treatedscapularskin*P<0.05,**P<0.01.a)anti-HBsconcentrationineachimmunizedmouse;b)comparisonofanti-HBsindifferentimmunizedmice.图3免疫后小鼠血清抗-HBs的变化Fig3Changesofanti-HBsinserumofimmunizedmice·665·
为16%±3.4%，两者之间比较差异具有统计学意义（n=3，P＜0.05）。2.2C48/80可诱导局部淋巴结肿大C48/80注射后不同时间点取DLN制备单细胞悬液，并采用流式细胞术检测CD11c+DC细胞数量。结果表明C48/80注射后DLN体积增大，DLN细胞总数随C48/80处理后时间的推移逐渐增多，C48/80处理后24h淋巴结细胞总数大约为NS对照组细胞总数的4倍，DC细胞数量约为对照组6倍（图2）。2.3各免疫组小鼠抗-HBs的检测疫苗接种后7d各组小鼠体内均未见明显抗体产生，14d时可测得极少量抗体出现，21、28和35d时各组抗体量均明显增加（图3a）。其中21、28d时抗-HBs增加量在不同组别间存在明显差异，12.5μg和25μgC48/80联合乙肝疫苗免疫组血清抗体含量较单纯乙肝疫苗免疫组明显升高，差异具有统计学意义，35d时各免疫组抗体含量均较高，各组之间比较差异无显著性（图3b）。2.4淋巴细胞增殖实验C48/80联合乙肝疫苗肩背部皮肤末次免疫后，取局部引流肩上和腋窝淋巴结，CCK-8试剂检测淋巴细胞对HBsAg的特异性增殖反应，结果如图4所示。各实验组与未加乙肝疫苗免疫组小鼠（对照组）比较，特异性淋巴细胞增殖刺激指数明显升高，差异具有统计学意义。单纯乙肝疫苗免疫组和加入C48/80免疫组小鼠相比较，C48/80联合免疫组小鼠较未加C48/80处理组小鼠特异性淋巴细胞增殖能力提高，差异具有统计学意义。12.5μgC48/80和25μgC48/80免疫组小鼠淋巴细胞增殖能力比较差异无统计学意义。3讨论肥大细胞和DC均存在于病原体及其他因子易于侵入的外周皮肤和黏膜部位，多种病原体成份、补体片段和小分子肥大细胞活化剂等可活化肥大细胞，图1NS（a）和Compound48/80（b）皮下注射后24h局部皮肤肥大细胞甲苯胺蓝染色(400×)Fig1Toluidineblue-stainedmastcellsa
【参考文献】：
期刊论文
[1]铝佐剂吸附CpG ODN增强重组乙肝疫苗免疫效应[J]. 王丽丽,马波,钱雯,柴俊东,赵志宏,白梅,唐业峰,李镭,杨喆. 免疫学杂志. 2015(01)
本文编号：3355133
【文章来源】：免疫学杂志. 2015,31(08)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
NS（a）和Compound48/80（b）皮下注射后24h局部皮肤肥大细胞甲苯胺蓝染色(400×)
唬?嘀植≡?宄煞荨⒉?体片段和小分子肥大细胞活化剂等可活化肥大细胞，图1NS（a）和Compound48/80（b）皮下注射后24h局部皮肤肥大细胞甲苯胺蓝染色(400×)Fig1Toluidineblue-stainedmastcellsat24hfollowingsubcutaneousinjectionofnormalsaline(a)orCompound48/80(b)(400×).**P<0.01,***P<0.001.RepresentativeimagesofFACSanalysisforDLNCD11c+cellsinNStreated(a)andC48/80treated(b)micewereshown,andthetotalcell(c)andCD11c+cell(d)numberincontrolandC48/80treatedsidewerestatisticallyanalyzed.图2NS或C48/80处理肩背部皮肤后24hDLN中细胞总数、DC细胞数检测Fig2ThenumberoftotalcellsandCD11c+cellsindraininglymphnodes24hafterNSorC48/80treatedscapularskin*P<0.05,**P<0.01.a)anti-HBsconcentrationineachimmunizedmouse;b)comparisonofanti-HBsindifferentimmunizedmice.图3免疫后小鼠血清抗-HBs的变化Fig3Changesofanti-HBsinserumofimmunizedmice·665·
为16%±3.4%，两者之间比较差异具有统计学意义（n=3，P＜0.05）。2.2C48/80可诱导局部淋巴结肿大C48/80注射后不同时间点取DLN制备单细胞悬液，并采用流式细胞术检测CD11c+DC细胞数量。结果表明C48/80注射后DLN体积增大，DLN细胞总数随C48/80处理后时间的推移逐渐增多，C48/80处理后24h淋巴结细胞总数大约为NS对照组细胞总数的4倍，DC细胞数量约为对照组6倍（图2）。2.3各免疫组小鼠抗-HBs的检测疫苗接种后7d各组小鼠体内均未见明显抗体产生，14d时可测得极少量抗体出现，21、28和35d时各组抗体量均明显增加（图3a）。其中21、28d时抗-HBs增加量在不同组别间存在明显差异，12.5μg和25μgC48/80联合乙肝疫苗免疫组血清抗体含量较单纯乙肝疫苗免疫组明显升高，差异具有统计学意义，35d时各免疫组抗体含量均较高，各组之间比较差异无显著性（图3b）。2.4淋巴细胞增殖实验C48/80联合乙肝疫苗肩背部皮肤末次免疫后，取局部引流肩上和腋窝淋巴结，CCK-8试剂检测淋巴细胞对HBsAg的特异性增殖反应，结果如图4所示。各实验组与未加乙肝疫苗免疫组小鼠（对照组）比较，特异性淋巴细胞增殖刺激指数明显升高，差异具有统计学意义。单纯乙肝疫苗免疫组和加入C48/80免疫组小鼠相比较，C48/80联合免疫组小鼠较未加C48/80处理组小鼠特异性淋巴细胞增殖能力提高，差异具有统计学意义。12.5μgC48/80和25μgC48/80免疫组小鼠淋巴细胞增殖能力比较差异无统计学意义。3讨论肥大细胞和DC均存在于病原体及其他因子易于侵入的外周皮肤和黏膜部位，多种病原体成份、补体片段和小分子肥大细胞活化剂等可活化肥大细胞，图1NS（a）和Compound48/80（b）皮下注射后24h局部皮肤肥大细胞甲苯胺蓝染色(400×)Fig1Toluidineblue-stainedmastcellsa
【参考文献】：
期刊论文
[1]铝佐剂吸附CpG ODN增强重组乙肝疫苗免疫效应[J]. 王丽丽,马波,钱雯,柴俊东,赵志宏,白梅,唐业峰,李镭,杨喆. 免疫学杂志. 2015(01)
本文编号：3355133
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