幽门螺杆菌感应蛋白CrdS的原核表达及其在酸适应调控中的作用

发布时间：2017-04-30 12:11

  本文关键词：幽门螺杆菌感应蛋白CrdS的原核表达及其在酸适应调控中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：原核表达并纯化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)CrdRS信号传导系统中的感应蛋白CrdS，并进行生物信息学分析，通过体外酸环境培养实验，探讨其在H.pylori酸适应调控中的作用。 方法：提取H.pylori26695标准株全基因组DNA,以此为模版，，PCR扩增编码CrdS蛋白的基因hp1364；构建重组克隆质粒pUCm-T-hp1364和原核表达质粒pQE30-hp1364，经PCR、双酶切和测序鉴定后，转化大肠埃希菌XL1blue，IPTG诱导表达目标蛋白；通过SDS-PAGE分析，Western blot鉴定表达蛋白,并对CrdS蛋白进行生物信息学分析。用纯化后的重组蛋白CrdS免疫家兔获得其免疫血清。通过体外在不同pH值的培养基中加入含抗CrdS的免疫血清培养H.pylori实验，初步探讨CrdS在H.pylori酸适应调控中的作用。 结果：以提取的H.pylori基因组DNA为模板，PCR扩增hp1364基因，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析，可见在1200bp处有一明显条带，与hp1364基因的分子量大小相符。重组克隆质粒pUCm-T-hp1364和原核表达质粒pQE30-hp1364经BamHⅠ/HindIII双酶切后，琼脂糖凝胶电泳分析可见约1200bp处有明显条带；测序后，经NCBI BLAST在线比对所测序列与hp1364基因序列完全相符。诱导表达的目标蛋白经SDS-PAGE分析，相对分子量约为46kDa，主要以包涵体形式存在。Western blot鉴定表明表达蛋白确为目标蛋白。生物信息学分析CrdS的核酸和氨基酸序列与其它H.pylori菌株比较具有极高的同源性，表面有许多亲水性区域，含有多种容易被磷酸化的氨基酸。免疫家兔后获得该重组蛋白的免疫血清，H.pylori酸环境培养实验表明CrdS能够影响H.pylori的生长。 结论：成功构建了重组克隆质粒pUCm-T-hp1364和原核表达质粒pQE30-hp1364，原核表达了H.pylori CrdS蛋白。初步证明该蛋白参与了H.pylori酸适应调控，为深入探讨H.pylori酸适应调控机制和新的抗H.pylori感染的途径提供了实验材料和依据。
【关键词】：幽门螺杆菌 CrdS 原核表达 酸适应 调控
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378.2
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 第一部分 幽门螺杆菌感应蛋白 CrdS 的原核表达及生物信息学分析13-37
• 1 材料与方法13-28
• 2 结果28-35
• 3 讨论35-37
• 第二部分 幽门螺杆菌感应蛋白 CrdS 在酸适应调控中的作用37-43
• 1 材料与方法37-40
• 2 结果40-41
• 3 讨论41-43
• 全文总结43-44
• 参考文献44-46
• 文献综述46-54
• 参考文献51-54
• 致谢54-55
• 攻读硕士研究生期间发表的论文及参加的学术会议55-56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 秦智强;瞿涤;;细菌双组分信号转导系统[J];国外医学(微生物学分册);2003年05期

2 郝艳华;张维;陈明;;细菌双组分系统的研究进展[J];中国农业科技导报;2012年02期

  本文关键词：幽门螺杆菌感应蛋白CrdS的原核表达及其在酸适应调控中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：336829