MBL调节白假丝酵母菌诱导DC成熟及分泌细胞因子的研究

发布时间：2017-04-30 19:01

  本文关键词：MBL调节白假丝酵母菌诱导DC成熟及分泌细胞因子的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景 甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin, MBL)是由肝细胞分泌的血浆蛋白,为C型凝集素超家族中胶凝素家族成员。树突状细胞(dendritic cell, DC)是体内最强大的抗原提呈细胞(antigen presenting cell, APC),是获得性免疫应答的直接介导者。已经报道MBL不仅可以直接诱导DC分化成熟,而且高浓度MBL还可抑制脂多糖诱导的DC成熟。但是至今为止,关于白假丝酵母菌(Candida albicans, C.albicans)诱导DC成熟及MBL对这种免疫效应是否有调节作用并无报道。因此,深入研究MBL对C. albicans诱导DC成熟的调节作用及机制,具有重要意义。 目的 分析MBL对C. albicans诱导DC分化成熟及分泌细胞因子的调节作用,并初步探讨其调控机制。 方法 1.细胞培养：Ficoll密度梯度离心法分离人PBMC,贴壁法分离Mo,将Mo在含100μg/L rhIL-4和rhGM-CSF的无血清培养基中培养5d,诱导Mo向imDC分化,加入不同浓度MBL及C.albicans继续培养2-4d,刺激imDC成熟,以人血清白蛋白(human serum albumin, HSA)和TNF-α作为对照。每三天半量换液一次,并补加相应的rhIL-4和rhGM-CSFα 2.CD分子检测：收集各培养组DC,流式分析DC表面与DC成熟相关的CD83、 CD86分子的表达。 3.细胞因子检测：收集各培养组DC上清液,ELISA检测C.albicans诱导的TNF-α、IL-8、IL-6和IL-1p等细胞因子的分泌水平。 4.细胞结合实验：将imDC和C.albicans分别用含不同浓度Ca2+的结合缓冲液重悬,加入FITC-MBL,37℃避光反应30min,FACS分析MBL与imDC的结合情况及MBL结合C.albicans的情况。 5.统计学分析：实验数据用SPSS17.0软件进行分析,实验结果以均数±标准差(x±s)表示,并用单因素方差分析和独立样木t检验进行数据统计,P0.05为差异有统计学意义,P0.01为差异具有显著性。 结果 1.200×倒置显微镜下观察可见,加rhIL-4和rhGM-CSF培养3-5d,细胞呈不规则形态,悬浮细胞增多,培养7d后发现细胞悬浮生长,且细胞膜伸出树根样突起。 2.与空白细胞组比较,C.albicans刺激组DC表面CD83.CD86表达均显著增多,TNF-a刺激组CD83、CD86表达量也显著增多,两组无明显差异,提示C.albicans可诱导DC分化成熟；而与C.albicans刺激组比较,C.albicans+MBL刺激组CD83、CD86表达明显减少,而Calbicans+HSA刺激组则无明显变化,提示高浓度MBL可抑制C.albicans诱导的DC成熟。 3.低浓度MBL(生理浓度)对C.albicans刺激DC分泌TNF-α、IL-8、IL-6及IL-1β无作用,高浓度MBL(超生理浓度)则对上述细胞因子的分泌有抑制作用,且呈浓度依赖性。 4.MBL均可与imDC及C.albicans结合,且这种结合具有Ca2+浓度依赖性。 结论 高浓度MBL抑制C.albicans诱导DC分化成熟,且MBL能够以浓度依赖方式抑制C. albicans刺激DC分泌细胞因子,这种调节作用与MBL的配体结合作用有关。
【关键词】：甘露聚糖结合凝集素 白假丝酵母菌 树突状细胞 细胞因子 免疫调节
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料12-18
• 方法18-23
• 结果23-29
• 讨论29-32
• 小结32-34
• 参考文献34-37
• 综述：MBL调节免疫反应的研究新进展37-47
• 参考文献43-47
• 附录47-49
• 攻读学位期间发表文章情况49-50
• 致谢50-51
• 个人简历51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 彭雪松;刘岚;;侵袭性真菌感染的研究进展[J];国际检验医学杂志;2010年09期

2 陈月;余新沛;刘莹;陈政良;;MBL对LPS诱导树突状细胞成熟的调节作用[J];免疫学杂志;2006年04期

3 王明永;张雅妮;雷鸣;张丽芸;卢晓;陈政良;;MBL抑制Jurkat细胞增殖和分泌IL-2[J];现代免疫学;2010年06期

4 王明永;张雅妮;张丽芸;卢晓;雷鸣;李瑞芳;陈政良;;MBL与Raji细胞结合特性的研究[J];生物化学与生物物理进展;2008年03期

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 刘莹;甘露聚糖结合凝集素对T淋巴细胞免疫功能调节作用的初步研究[D];南方医科大学;2011年

2 王明永;甘露聚糖结合凝集素调节获得性免疫应答的初步研究[D];南方医科大学;2008年

  本文关键词：MBL调节白假丝酵母菌诱导DC成熟及分泌细胞因子的研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：337380