犬腺病毒1型疫苗株E3缺失表达载体的构建

发布时间：2021-09-02 01:37

　　人腺病毒被广泛地作为基因转移载体用于人类基因治疗或制备成重组病毒疫苗。但人腺病毒有两个主要缺点，首先是大多数人曾经感染过腺病毒，体内存在针对该病毒的免疫应答，这导致转入的基因因已存在的免疫反应而被逐渐清除，使得导入基因表达持续时间短。其次，即使只带有极少人腺病毒包装信号和反转重复序列的人腺病毒载体也有和野生人腺病毒共复制的可能性，这就影响到其作为载体使用的安全性。这一切均限制了人腺病毒载体的应用。动物腺病毒能转染人细胞，具备将外源基因转移到人细胞内的能力，人群中也不存在针对它们的免疫应答，因此，开发动物腺病毒以代替人腺病毒作为基因转移载体是一个很好的尝试，至少它们能成为重组疫苗载体在各自种群中作出贡献。已经构建成功的重组动物腺病毒有重组牛腺病毒3型，猪腺病毒3型，羊腺病毒和犬腺病毒2型。现在我们又发展了一个新的极具重组疫苗和基因转移载体潜力的动物腺病毒——犬腺病毒1型疫苗株（Cannaught Laboratory Limited，CLL）。 在本室已构建克隆有CLL DNA右末端59-100mu的质粒p8基础上，我们对CLL DNA的E3区，pVⅢ基因和部分fiber基因进行序... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：94 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

本实验室已构建的质粒p日，含cLLDNA59一，00ou和〔3区

cLLDNA〔3缺失载体构建路线示意图

酶切鉴定(图4):用质粒上单一酶切位点Not工和P粒切成一条带，大小约3.Ikb，证明其上连有Linker并酶切鉴定(图5):用质粒上单一酶切位点Pme工和No成一条带，大小约15kb，证明克隆进Linker。物对质粒p10E3缺失部分测序分析，原约IO80PbBa部分缺失66Obp，并插入了有多克隆位点Pmel，Notl


本文编号：3378052