抗日本血吸虫病天然分子靶基因pVAX1/SjRPS4·CB双价疫苗与联合免疫的研究
发布时间：2021-09-02 19:46
本实验室前期的研究已经证实,日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原26-28kDa（SIEA26-28kDa）和成虫31-32kDa蛋白（Sj31-32kDa）天然分子均可诱导宿主产生较好的抗雌虫、抗卵胚免疫效果。但是由于天然分子抗原疫苗的分离及批量制备相对困难,束缚了其在现场防治中的应用。近几年来,本课题组一直致力于筛选、鉴定天然分子疫苗的编码基因,随后构建了几种天然分子疫苗相关的核酸疫苗,包括SIEA26-28kDa相关的pcDNA3.0/SjHGPRT、pcDNA3.0/SjSDISP、pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjRPL7,Sj31/32kDa相关的pcDNA3.0/SjCB等,并证实几种疫苗均能产生一定程度的免疫保护力,但单一的核酸疫苗的免疫保护效果尚有待进一步提高。因此,本研究内容之一是将SjRPS4、SjCB两种编码天然分子疫苗的目的基因构建成双价疫苗,观察其免疫小鼠后抗日本血吸虫攻击感染的保护效果;研究之二是通过采用“初免-加强”的免疫策略,将pcDNA3.0/SjSDISP核酸疫苗、Sj31-32天然分子疫苗联合起来进行免疫,观察是否可以在减少天然分子...
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
习RPs4.cB在小鼠肌肉细胞的表达(醉免疾组织化学染色，x100)
peDNA3.0/Sj砂54·CB、 peDNA3.0/SjRPs4及pVAXI、peDNA3.o空载体、pBs对照，14d后取肌肉组织切片进行间接免疫荧光及酶免疫组织化学检测。HE染色显示切片位置正确(图1一6);间接免疫荧光及酶免疫组织化学染色显示显示疫苗组小鼠肌细胞中呈现较强的绿色荧光或棕黄色颗粒，而对照组肌细胞内呈阴性反应(图l一7，l一8)。上述结果证明pVAXI/SjRPS4·CB、peDNA3刀苟Rps4·CB在小鼠肌细胞中成功表达。 A(X100)B(X200)图1一6:小鼠肌组织HE染色Figurel一6:Kun爪 ingmousetissuestainedwithHE图1一7:习RPs4.cB在小鼠肌肉细胞的表达(醉免疾组织化学染色，x100)Figl一 7:.ExPreosionofPVAXllS)RPS4· CBandpcDNA3.0左砂RPS4· CBinquadricePsfemoris ofKunmingmise(Immunohistochemist叮assay，xl00) A:PBSgrouP:B:PeDNA3.0grouP:C:PVAXIgrouP;D:PeDNA3， 0/SjRPS4grouP:E:PeDNA3.0/SjRPS4· CBgrouP:F:PVAXI/SjRPS4· CBgrouP
硕士学位论文第一部分 DEF图1一 8:sjRPs4.cB在小鼠肌肉细胞的表达(间接免疚荧光检测，xl00)Figl一 8:.ExPressionofPVAXI/SjRPS4· CBandPcDNA3刀苟RPS4·CB inquadrieePsfemorisofKunmingmise(IFA，X100) A:PBSgrouP:B:PeDNA3.0grouP;C:PVAXIgrouP:D:PeDNA3.0/习 RPS4grouP:E:PeDNA3.0/S/RPS4· CBgrouP;F:PVAXI/Sj’RPS4· CBgrouP 2.6pVAXI/邃爪PS4·CB、pcDNA3.0/国声PS4·CB双价疫苗免疫保护效果观察攻击感染后42天剖杀小鼠，可见PBS、PcDNA3、pVAXI空白质粒对照组的小鼠肝脏呈暗褐色，虫卵结节细密;pVAXI/SjRpS4·CB(v3)、 peDNA3.o/SjRPs4·eB(DS)·PcDNA3.0/SjRPS4、PcDNA3.o/SjCB免疫组的小鼠肝脏色泽较鲜红，虫卵结节较少(图1一9)。.协叮下〕}一’-.…巨二}、〔二〕厂，)Figl一
【参考文献】：
期刊论文
[1]Intra-portal transplantation of bone marrow stromal cells ameliorates liver fibrosis in mice[J]. Jin-Fang Zheng and Li-Jian Liang Department of Hepatobiliary Surgery, People’s Hospital of Hainan Province, Haikou 570311, China Department of Hepatobiliary Surgery,First Affiliated Hospital,Sun Yat- Sen University,Guangzhou 510080,China. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2008(03)
[2]日本血吸虫鸡尾酒式DNA疫苗与蛋白疫苗联合应用增强免疫保护作用的研究[J]. 戴洋,朱荫昌,王晓婷,唐建霞,鲁飞,徐明,许永良,管晓虹. 中国血吸虫病防治杂志. 2008(01)
[3]东方田鼠抗日本血吸虫抗性相关靶基因筛选[J]. 孙毅,孙焕,贾人初,刘金明,苑纯秀,石耀军,陆珂,李浩,金亚美,林矫矫. 中国血吸虫病防治杂志. 2008(01)
[4]2006年全国血吸虫病疫情通报[J]. 郝阳,吴晓华,郑浩,王立英,郭家钢,夏刚,陈朝,周晓农. 中国血吸虫病防治杂志. 2007(06)
[5]血清羟脯氨酸和透明质酸对当归补血汤治疗兔血吸虫病肝纤维化的效果评价[J]. 朱剑君,何永康,梁逸曾,喻鑫玲,赵雅琴,周杰,王媛圆,石孟芝,李岳生. 中国血吸虫病防治杂志. 2007(05)
[6]高效天然分子疫苗免疫猪血清筛选尾蚴抗原的结果分析[J]. 刘雪琴,汪世平,曾少华,高冬梅,何卓. 寄生虫与医学昆虫学报. 2007(03)
[7]日本血吸虫双价DNA疫苗pVIVO2-Sj14-Sj23免疫方案的研究[J]. 艾熙,夏丽霞,谢姣,胡媛,石佑恩. 中国血吸虫病防治杂志. 2007(03)
[8]重组日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶可生物降解微球单剂免疫效果的研究[J]. 唐小牛,周萍萍,高锡银,汪学龙. 中国血吸虫病防治杂志. 2007(02)
[9]不同方式构建的日本血吸虫双价DNA疫苗保护力的比较[J]. 胡媛,石佑恩,朱晓华,李春燕,余龙江. 热带病与寄生虫学. 2007(01)
[10]抗GD2单链抗体-IL-2融合蛋白基因的构建及表达[J]. 倪剑锋,纪剑飞,吕安国,黄日波,韦宇拓,吴文芳. 生物医学工程学杂志. 2007(01)
博士论文
[1]日本血吸虫未成熟卵单链抗体库的构建、筛选及在疫苗研究中的应用[D]. 何卓.中南大学 2008
[2]牛结核病DNA疫苗的研究[D]. 宫强.中国农业科学院 2007
[3]SjHGPRT和SjSDISP全长cDNA的克隆、表达及保护性免疫研究[D]. 余俊龙.中南大学 2006
[4]日本血吸虫雌雄合抱相关蛋白的分离、鉴定及其DNA疫苗的研究[D]. 戴橄.中南大学 2006
[5]乙型肝炎治疗性疫苗的研究[D]. 何晓文.第二军医大学 2005
[6]日本血吸虫新疫苗分子筛选鉴定及细胞因子对核酸疫苗免疫的调节[D]. 陈欲晓.中南大学 2003
硕士论文
[1]Sj31/32kD天然分子疫苗编码基因的鉴定及其特异性单链抗体的筛选[D]. 李林.中南大学 2008
[2]日本血吸虫重组多价疫苗的研制与免疫保护功能评估[D]. 章登吉.上海师范大学 2006
[3]恶性疟疾多期多价疫苗的构建及免疫原性的研究[D]. 张青锋.第二军医大学 2002
本文编号：3379622
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
习RPs4.cB在小鼠肌肉细胞的表达(醉免疾组织化学染色，x100)
peDNA3.0/Sj砂54·CB、 peDNA3.0/SjRPs4及pVAXI、peDNA3.o空载体、pBs对照，14d后取肌肉组织切片进行间接免疫荧光及酶免疫组织化学检测。HE染色显示切片位置正确(图1一6);间接免疫荧光及酶免疫组织化学染色显示显示疫苗组小鼠肌细胞中呈现较强的绿色荧光或棕黄色颗粒，而对照组肌细胞内呈阴性反应(图l一7，l一8)。上述结果证明pVAXI/SjRPS4·CB、peDNA3刀苟Rps4·CB在小鼠肌细胞中成功表达。 A(X100)B(X200)图1一6:小鼠肌组织HE染色Figurel一6:Kun爪 ingmousetissuestainedwithHE图1一7:习RPs4.cB在小鼠肌肉细胞的表达(醉免疾组织化学染色，x100)Figl一 7:.ExPreosionofPVAXllS)RPS4· CBandpcDNA3.0左砂RPS4· CBinquadricePsfemoris ofKunmingmise(Immunohistochemist叮assay，xl00) A:PBSgrouP:B:PeDNA3.0grouP:C:PVAXIgrouP;D:PeDNA3， 0/SjRPS4grouP:E:PeDNA3.0/SjRPS4· CBgrouP:F:PVAXI/SjRPS4· CBgrouP
硕士学位论文第一部分 DEF图1一 8:sjRPs4.cB在小鼠肌肉细胞的表达(间接免疚荧光检测，xl00)Figl一 8:.ExPressionofPVAXI/SjRPS4· CBandPcDNA3刀苟RPS4·CB inquadrieePsfemorisofKunmingmise(IFA，X100) A:PBSgrouP:B:PeDNA3.0grouP;C:PVAXIgrouP:D:PeDNA3.0/习 RPS4grouP:E:PeDNA3.0/S/RPS4· CBgrouP;F:PVAXI/Sj’RPS4· CBgrouP 2.6pVAXI/邃爪PS4·CB、pcDNA3.0/国声PS4·CB双价疫苗免疫保护效果观察攻击感染后42天剖杀小鼠，可见PBS、PcDNA3、pVAXI空白质粒对照组的小鼠肝脏呈暗褐色，虫卵结节细密;pVAXI/SjRpS4·CB(v3)、 peDNA3.o/SjRPs4·eB(DS)·PcDNA3.0/SjRPS4、PcDNA3.o/SjCB免疫组的小鼠肝脏色泽较鲜红，虫卵结节较少(图1一9)。.协叮下〕}一’-.…巨二}、〔二〕厂，)Figl一
【参考文献】：
期刊论文
[1]Intra-portal transplantation of bone marrow stromal cells ameliorates liver fibrosis in mice[J]. Jin-Fang Zheng and Li-Jian Liang Department of Hepatobiliary Surgery, People’s Hospital of Hainan Province, Haikou 570311, China Department of Hepatobiliary Surgery,First Affiliated Hospital,Sun Yat- Sen University,Guangzhou 510080,China. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2008(03)
[2]日本血吸虫鸡尾酒式DNA疫苗与蛋白疫苗联合应用增强免疫保护作用的研究[J]. 戴洋,朱荫昌,王晓婷,唐建霞,鲁飞,徐明,许永良,管晓虹. 中国血吸虫病防治杂志. 2008(01)
[3]东方田鼠抗日本血吸虫抗性相关靶基因筛选[J]. 孙毅,孙焕,贾人初,刘金明,苑纯秀,石耀军,陆珂,李浩,金亚美,林矫矫. 中国血吸虫病防治杂志. 2008(01)
[4]2006年全国血吸虫病疫情通报[J]. 郝阳,吴晓华,郑浩,王立英,郭家钢,夏刚,陈朝,周晓农. 中国血吸虫病防治杂志. 2007(06)
[5]血清羟脯氨酸和透明质酸对当归补血汤治疗兔血吸虫病肝纤维化的效果评价[J]. 朱剑君,何永康,梁逸曾,喻鑫玲,赵雅琴,周杰,王媛圆,石孟芝,李岳生. 中国血吸虫病防治杂志. 2007(05)
[6]高效天然分子疫苗免疫猪血清筛选尾蚴抗原的结果分析[J]. 刘雪琴,汪世平,曾少华,高冬梅,何卓. 寄生虫与医学昆虫学报. 2007(03)
[7]日本血吸虫双价DNA疫苗pVIVO2-Sj14-Sj23免疫方案的研究[J]. 艾熙,夏丽霞,谢姣,胡媛,石佑恩. 中国血吸虫病防治杂志. 2007(03)
[8]重组日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶可生物降解微球单剂免疫效果的研究[J]. 唐小牛,周萍萍,高锡银,汪学龙. 中国血吸虫病防治杂志. 2007(02)
[9]不同方式构建的日本血吸虫双价DNA疫苗保护力的比较[J]. 胡媛,石佑恩,朱晓华,李春燕,余龙江. 热带病与寄生虫学. 2007(01)
[10]抗GD2单链抗体-IL-2融合蛋白基因的构建及表达[J]. 倪剑锋,纪剑飞,吕安国,黄日波,韦宇拓,吴文芳. 生物医学工程学杂志. 2007(01)
博士论文
[1]日本血吸虫未成熟卵单链抗体库的构建、筛选及在疫苗研究中的应用[D]. 何卓.中南大学 2008
[2]牛结核病DNA疫苗的研究[D]. 宫强.中国农业科学院 2007
[3]SjHGPRT和SjSDISP全长cDNA的克隆、表达及保护性免疫研究[D]. 余俊龙.中南大学 2006
[4]日本血吸虫雌雄合抱相关蛋白的分离、鉴定及其DNA疫苗的研究[D]. 戴橄.中南大学 2006
[5]乙型肝炎治疗性疫苗的研究[D]. 何晓文.第二军医大学 2005
[6]日本血吸虫新疫苗分子筛选鉴定及细胞因子对核酸疫苗免疫的调节[D]. 陈欲晓.中南大学 2003
硕士论文
[1]Sj31/32kD天然分子疫苗编码基因的鉴定及其特异性单链抗体的筛选[D]. 李林.中南大学 2008
[2]日本血吸虫重组多价疫苗的研制与免疫保护功能评估[D]. 章登吉.上海师范大学 2006
[3]恶性疟疾多期多价疫苗的构建及免疫原性的研究[D]. 张青锋.第二军医大学 2002
本文编号：3379622
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